sdjisafhshfuk's blog
Films d'automne 2014
Taraji P. Henson commence à penser à laisser un conducteur (Idris Elba) avoir des problèmes de voiture pour utiliser son téléphone à domicile, surtout quand il se révèle comme un sociopathe sadique qui va après sa famille.
'The Maze Runner' Date de sortie: 19 sept.
Basé sur le premier roman de James Dashner dans sa série de livres pour adultes les plus vendus, 'The Maze Runner' met en vedette 'Teen Wolf' acteur Dylan O 'Brien comme Thomas, qui se réveille dans un environnement labyrinthique bizarre avec sa mémoire effacée. Les bandes de Thomas avec d'autres garçons, et une fille solitaire, tentent de sortir du labyrinthe,faux insert rolex submariner, alors qu'elles tentent également de comprendre comment elles sont arrivées et qui les a envoyées là.
Le film a suscité beaucoup d'intérêt auprès des jeunes téléspectateurs,rolex submariner tarif faux, en particulier chez les fans des livres malgré la campagne de marketing de base relativement faible du studio.
Les premières critiques indiquent que cela pourrait être le prochain 'Jeux de la faim' ou 'Divergent'.
'Gone Girl' Date de sortie: 3 octobre
'Gone Girl' est l'un des films les plus attendus de la saison des films d'automne.
L'avenir Batman Ben Affleck joue un mari qui soupçonne quand sa femme (Rosamund Pike) disparaît mystérieusement.
'Gone Girl' est basé sur le livre le plus vendu de Gillian Flynn (qui a également écrit le scénario) et vient du célèbre réalisateur David Fincher.
Avant de venir aux théâtres, 'Gone Girl' marquera ses débuts au Festival de New York en tant que sélection de nuit d'ouverture.
'Birdman' Date de sortie: 17 octobre
Tout le monde attend pour voir si Michael Keaton prend sa tête humoristique sur son personnage de Batman qui volera au théâtre,faux mouvement rolex submariner.
'Birdman' servira d'entrée de nuit de fermeture au New York Film Festival de cette année.
'Book of Life' Date de sortie: 17 octobre
Christina Applegate, Ice Cube, Channing Tatum, Ron Perlman, Cheech Marin et Danny Trejo témoignent de ce conte animé en 3D, du cinéaste mexicain Jorge R. Gutierrez.
Crédit: Twentieth Century Fox Animation
'Ouija' Date de sortie: 24 octobre
Cela doit être mieux que l'adaptation 'Battleship',faux montre rolex submariner occasion.
Date de sortie 'sauvage': 5 déc.
Comparaisons de dessins par rapport à 2008 'In the Wild', Reese Witherspoon joue une femme de la vie réelle qui essaie de se retrouver en randonnée solo le long du Pacific Crest Trail.
Taraji P. Henson commence à penser à laisser un conducteur (Idris Elba) avoir des problèmes de voiture pour utiliser son téléphone à domicile, surtout quand il se révèle comme un sociopathe sadique qui va après sa famille.
'The Maze Runner' Date de sortie: 19 sept.
Basé sur le premier roman de James Dashner dans sa série de livres pour adultes les plus vendus, 'The Maze Runner' met en vedette 'Teen Wolf' acteur Dylan O 'Brien comme Thomas, qui se réveille dans un environnement labyrinthique bizarre avec sa mémoire effacée. Les bandes de Thomas avec d'autres garçons, et une fille solitaire, tentent de sortir du labyrinthe,faux insert rolex submariner, alors qu'elles tentent également de comprendre comment elles sont arrivées et qui les a envoyées là.
Le film a suscité beaucoup d'intérêt auprès des jeunes téléspectateurs,rolex submariner tarif faux, en particulier chez les fans des livres malgré la campagne de marketing de base relativement faible du studio.
Les premières critiques indiquent que cela pourrait être le prochain 'Jeux de la faim' ou 'Divergent'.
'Gone Girl' Date de sortie: 3 octobre
'Gone Girl' est l'un des films les plus attendus de la saison des films d'automne.
L'avenir Batman Ben Affleck joue un mari qui soupçonne quand sa femme (Rosamund Pike) disparaît mystérieusement.
'Gone Girl' est basé sur le livre le plus vendu de Gillian Flynn (qui a également écrit le scénario) et vient du célèbre réalisateur David Fincher.
Avant de venir aux théâtres, 'Gone Girl' marquera ses débuts au Festival de New York en tant que sélection de nuit d'ouverture.
'Birdman' Date de sortie: 17 octobre
Tout le monde attend pour voir si Michael Keaton prend sa tête humoristique sur son personnage de Batman qui volera au théâtre,faux mouvement rolex submariner.
'Birdman' servira d'entrée de nuit de fermeture au New York Film Festival de cette année.
'Book of Life' Date de sortie: 17 octobre
Christina Applegate, Ice Cube, Channing Tatum, Ron Perlman, Cheech Marin et Danny Trejo témoignent de ce conte animé en 3D, du cinéaste mexicain Jorge R. Gutierrez.
Crédit: Twentieth Century Fox Animation
'Ouija' Date de sortie: 24 octobre
Cela doit être mieux que l'adaptation 'Battleship',faux montre rolex submariner occasion.
Date de sortie 'sauvage': 5 déc.
Comparaisons de dessins par rapport à 2008 'In the Wild', Reese Witherspoon joue une femme de la vie réelle qui essaie de se retrouver en randonnée solo le long du Pacific Crest Trail.
Exactement ce que signifie la terminologie
Les «banquiers», «les riches» et les «1%» sont devenus une partie du lexique d'un tourment de protestation. Mais qu'entendent vraiment les termes?
Une vague de protestations à travers le monde et de la colère plus mesurée exprimée dans les pages de lettres de journaux et sur les sites de réseaux sociaux ont jeté un nouveau lexique de ressentiment envers les riches et les puissants.
'Les riches' Tout le monde connaît quelqu'un qu'ils considèrent comme riche. Mais beaucoup se débattraient d'une définition précise, et les riches considérables par les autres seraient éloignés de l'utilisation du terme.
Dans son livre Richistan, le journaliste de Wall Street Journal, Robert Frank, a conclu que «la définition de richesse des gens est subjective et est généralement le double de leur valeur nette actuelle». Certaines personnes définiraient les riches comme ayant plus d'argent que vous avez besoin de vivre, mais La définition des «besoins» varie considérablement.
Pour certains, la simple possession d'une entreprise signifie que vous êtes riche, qu'il s'agisse d'un magasin d'angle ou d'une entreprise multinationale. Au cours des émeutes d'été en Angleterre, deux poulots adolescents ont expliqué qu'ils montraient la police et les «riches» qu'ils pouvaient faire Ce qu'ils voulaient. Mais leur définition de richesse semblait englober toute personne qui possédait un magasin. 'Ce sont les riches, les gens qui ont des entreprises', a déclaré un.
À l'autre bout du spectre, le propriétaire de Chelsea, Roman Abramovich,faux rolex submariner or et acier fond bleu, a été pressé récemment lors d'une audience sur la question de savoir si un de ses partenaires était, à son avis, riche.
'Il est difficile pour moi de dire si quelqu'un est une personne riche ou pas une personne riche', a-t-il déclaré.
À la traîne sous la surface,montre rolex submariner date faux, on sait que «le riche» est un terme hostile à cette époque. Au cours de l'élection présidentielle américaine de 2008, le républicain John McCain a déclaré qu'il n'était pas un homme riche, même s'il possédait plusieurs maisons.
Mais existe-t-il un ensemble de paramètres neutres pour la richesse?
L'une des façons de diviser les riches de la classe moyenne est le taux d'imposition le plus élevé,faux couronne rolex submariner, qui débute 150 000 par an au Royaume-Uni et 379 151 $ aux États-Unis.
Les millionnaires étaient les qualificatifs les plus évidents pour le label «riche», mais ils ne sont pas très rares ces jours-ci et le nombre de milliardaires augmente.
La liste de Forbes des personnes les plus riches du monde regroupe plus de 1 200 milliardaires à travers le monde, la Russie et la Chine disposant de plus de 100 milliardaires chacun. Les États-Unis ont plus de 400 milliardaires et le fondateur de Microsoft Bill Gates est le sommet de la pile avec un filet Une valeur de 59 milliards de dollars.
Il y a 73 milliardaires au Royaume-Uni par rapport à 53 l'année précédente, selon la dernière liste Sunday Times Rich.
Le professeur John Van Reenen, directeur du Centre for Economic Performance, déclare que vous devez faire plus de 140 000 par an pour figurer parmi les 1% supérieurs des salariés du Royaume-Uni. (Voir l'entrée ci-dessous sur le 1%.)
'Si vous regardez le top 1% de la population au cours des 100 dernières années, il y a un siècle, un gros morceau de l'argent n'aurait pas été gagné par les revenus et les legs. Aujourd'hui, la grande majorité provient gains.'
La définition de riches a certainement changé avec le temps.
'Puissant, puissant, noble, génial'. C'est la première référence à la richesse du Oxford English Dictionary, mais cette définition,faux rolex submariner occasion, issue de l'époque anglo-saxonne, est maintenant obsolète.
Mais cela signifiait aussi 'avoir beaucoup d'argent ou des biens abondants, riches, riches, riches' et ce sens a perdu le cap.
Plus vous allez, les riches étaient plus riches en termes comparatifs, explique le professeur Bill Rubinstein, un expert sur l'histoire des riches. Mais il y a plus de gens riches maintenant en raison de la hausse des prix des maisons au Royaume-Uni.
En 1880, une personne riche aurait eu 100 000 actifs ou un revenu de 10 000 par an, dit-il. Une centaine de personnes par an sont mortes en quittant 100 000 et, en 1910, il s'agissait de 250 'une fraction microscopique du nombre de décès à l'époque'.
Le professeur Rubinstein croit que les bénéfices annuels de 250 000 personnes sont aujourd'hui le point de coupure et affirment que la fracture des riches pauvres n'a toujours été tolérable que si les pauvres ont des opportunités.
'Les 1%' 'Nous sommes les 99%'.
C'est le cri de ralliement du mouvement Occupy Wall Street qui a lancé ses tentes dans le quartier financier de Manhattan le 17 septembre dans un mouvement qui s'est répandu dans d'autres villes américaines et à travers le monde.
Bien qu'il soit difficile de définir les objectifs précis des manifestants, leur terminologie a été largement utilisée dans les médias.
Les manifestants prétendent défendre les 99% des Américains qui n'ont pas été renfloués par le gouvernement.
En 2009, il a fallu «juste» 343 927 $ par année pour rejoindre le groupe élite au sommet de l'échelle des contribuables américains. Juste au-dessous de 1,4 million de ménages admissibles à l'entrée, ils ont gagné près de 17% du revenu du pays et ont payé environ 37% de leur impôt sur le revenu.
Richard Wolff, professeur d'économie émérite à l'Université du Massachusetts, a utilisé les chiffres d'un nouveau rapport du Bureau du budget du Congrès pour sauvegarder la revendication de base de Occupy Wall Street.
'Tout simplement, le rapport du CBO montre que, au cours du dernier quart de siècle (1979 à 2007, pour être exact), les 1% des revenus les plus élevés ont bénéficié de gains de revenus réels lointains, beaucoup plus importants que les autres 99%', a-t-il écrit.
Les «banquiers», «les riches» et les «1%» sont devenus une partie du lexique d'un tourment de protestation. Mais qu'entendent vraiment les termes?
Une vague de protestations à travers le monde et de la colère plus mesurée exprimée dans les pages de lettres de journaux et sur les sites de réseaux sociaux ont jeté un nouveau lexique de ressentiment envers les riches et les puissants.
'Les riches' Tout le monde connaît quelqu'un qu'ils considèrent comme riche. Mais beaucoup se débattraient d'une définition précise, et les riches considérables par les autres seraient éloignés de l'utilisation du terme.
Dans son livre Richistan, le journaliste de Wall Street Journal, Robert Frank, a conclu que «la définition de richesse des gens est subjective et est généralement le double de leur valeur nette actuelle». Certaines personnes définiraient les riches comme ayant plus d'argent que vous avez besoin de vivre, mais La définition des «besoins» varie considérablement.
Pour certains, la simple possession d'une entreprise signifie que vous êtes riche, qu'il s'agisse d'un magasin d'angle ou d'une entreprise multinationale. Au cours des émeutes d'été en Angleterre, deux poulots adolescents ont expliqué qu'ils montraient la police et les «riches» qu'ils pouvaient faire Ce qu'ils voulaient. Mais leur définition de richesse semblait englober toute personne qui possédait un magasin. 'Ce sont les riches, les gens qui ont des entreprises', a déclaré un.
À l'autre bout du spectre, le propriétaire de Chelsea, Roman Abramovich,faux rolex submariner or et acier fond bleu, a été pressé récemment lors d'une audience sur la question de savoir si un de ses partenaires était, à son avis, riche.
'Il est difficile pour moi de dire si quelqu'un est une personne riche ou pas une personne riche', a-t-il déclaré.
À la traîne sous la surface,montre rolex submariner date faux, on sait que «le riche» est un terme hostile à cette époque. Au cours de l'élection présidentielle américaine de 2008, le républicain John McCain a déclaré qu'il n'était pas un homme riche, même s'il possédait plusieurs maisons.
Mais existe-t-il un ensemble de paramètres neutres pour la richesse?
L'une des façons de diviser les riches de la classe moyenne est le taux d'imposition le plus élevé,faux couronne rolex submariner, qui débute 150 000 par an au Royaume-Uni et 379 151 $ aux États-Unis.
Les millionnaires étaient les qualificatifs les plus évidents pour le label «riche», mais ils ne sont pas très rares ces jours-ci et le nombre de milliardaires augmente.
La liste de Forbes des personnes les plus riches du monde regroupe plus de 1 200 milliardaires à travers le monde, la Russie et la Chine disposant de plus de 100 milliardaires chacun. Les États-Unis ont plus de 400 milliardaires et le fondateur de Microsoft Bill Gates est le sommet de la pile avec un filet Une valeur de 59 milliards de dollars.
Il y a 73 milliardaires au Royaume-Uni par rapport à 53 l'année précédente, selon la dernière liste Sunday Times Rich.
Le professeur John Van Reenen, directeur du Centre for Economic Performance, déclare que vous devez faire plus de 140 000 par an pour figurer parmi les 1% supérieurs des salariés du Royaume-Uni. (Voir l'entrée ci-dessous sur le 1%.)
'Si vous regardez le top 1% de la population au cours des 100 dernières années, il y a un siècle, un gros morceau de l'argent n'aurait pas été gagné par les revenus et les legs. Aujourd'hui, la grande majorité provient gains.'
La définition de riches a certainement changé avec le temps.
'Puissant, puissant, noble, génial'. C'est la première référence à la richesse du Oxford English Dictionary, mais cette définition,faux rolex submariner occasion, issue de l'époque anglo-saxonne, est maintenant obsolète.
Mais cela signifiait aussi 'avoir beaucoup d'argent ou des biens abondants, riches, riches, riches' et ce sens a perdu le cap.
Plus vous allez, les riches étaient plus riches en termes comparatifs, explique le professeur Bill Rubinstein, un expert sur l'histoire des riches. Mais il y a plus de gens riches maintenant en raison de la hausse des prix des maisons au Royaume-Uni.
En 1880, une personne riche aurait eu 100 000 actifs ou un revenu de 10 000 par an, dit-il. Une centaine de personnes par an sont mortes en quittant 100 000 et, en 1910, il s'agissait de 250 'une fraction microscopique du nombre de décès à l'époque'.
Le professeur Rubinstein croit que les bénéfices annuels de 250 000 personnes sont aujourd'hui le point de coupure et affirment que la fracture des riches pauvres n'a toujours été tolérable que si les pauvres ont des opportunités.
'Les 1%' 'Nous sommes les 99%'.
C'est le cri de ralliement du mouvement Occupy Wall Street qui a lancé ses tentes dans le quartier financier de Manhattan le 17 septembre dans un mouvement qui s'est répandu dans d'autres villes américaines et à travers le monde.
Bien qu'il soit difficile de définir les objectifs précis des manifestants, leur terminologie a été largement utilisée dans les médias.
Les manifestants prétendent défendre les 99% des Américains qui n'ont pas été renfloués par le gouvernement.
En 2009, il a fallu «juste» 343 927 $ par année pour rejoindre le groupe élite au sommet de l'échelle des contribuables américains. Juste au-dessous de 1,4 million de ménages admissibles à l'entrée, ils ont gagné près de 17% du revenu du pays et ont payé environ 37% de leur impôt sur le revenu.
Richard Wolff, professeur d'économie émérite à l'Université du Massachusetts, a utilisé les chiffres d'un nouveau rapport du Bureau du budget du Congrès pour sauvegarder la revendication de base de Occupy Wall Street.
'Tout simplement, le rapport du CBO montre que, au cours du dernier quart de siècle (1979 à 2007, pour être exact), les 1% des revenus les plus élevés ont bénéficié de gains de revenus réels lointains, beaucoup plus importants que les autres 99%', a-t-il écrit.
Immunologie translationnelle clinique
RÉSUMÉS DE LA RECHERCHELeishmaniasis: le parasite survit en modifiant l'expression des protéines de surface. Le parasite protozoaire Leishmania donovani modifie l'expression des protéines sur les globules blancs qu'il infecte pour assurer sa propre survie. Pijush Das du CSIR Indian Institute of Chemical Biology à Kolkata et ses collègues ont comparé la réponse des globules blancs connus sous le nom de macrophages aux dommages chimiques et à l'infection par un parasite responsable de la leishmaniose. Ils ont constaté que les macrophages traités avec du peroxyde d'hydrogène,montre rolex oyster perpetual day date replique, un agent nuisible aux cellules, avaient augmenté l'expression d'une protéine de surface appelée PD 1 qui bloque une voie de survie cellulaire clé,replique rolex oyster perpetual, entraînant la mort cellulaire. En revanche, les macrophages infectés par L. donovani ont des niveaux inférieurs de PD 1 et les cellules ont survécu. Les chercheurs estiment que le parasite diminue l'expression de PD 1 dans les cellules hôtes pour assurer leur propre survie. L'activation de la PD 1 avec des médicaments pourrait aider à traiter la leishmaniose et d'autres maladies associées aux macrophages.
Voir l'article connexeLes résumés de recherche de la publication complète
Le numéro de mars 2016 de l'immunologie et de la biologie cellulaire contient une caractéristique spéciale sur la génomique cellulaire unique à la fine pointe et la modélisation en immunologie. L'apparition récente de la génomique cellulaire unique a offert des possibilités sans précédent de caractérisation indépendante de l'hétérogénéité cellulaire et des états réglementaires. Dans le même temps,contrefaçon montre rolex day date, les vastes ensembles de données produits par ces techniques ont souligné la nécessité de nouveaux outils de bioinformatique pour utiliser l'information contenue au maximum. Dans cette caractéristique spéciale, les méthodes expérimentales pour produire de telles données ainsi que les approches de modélisation sélectionnées sont examinées,contrefaçon oyster perpetual day date prix, en mettant l'accent sur les applications sur l'étude du système immunitaire. L'immunologie et la biologie cellulaire remercient les coordinateurs de cette spéciale Tapio L et Valentina Proserpio pour leur planification et leur contribution.
RÉSUMÉS DE LA RECHERCHELeishmaniasis: le parasite survit en modifiant l'expression des protéines de surface. Le parasite protozoaire Leishmania donovani modifie l'expression des protéines sur les globules blancs qu'il infecte pour assurer sa propre survie. Pijush Das du CSIR Indian Institute of Chemical Biology à Kolkata et ses collègues ont comparé la réponse des globules blancs connus sous le nom de macrophages aux dommages chimiques et à l'infection par un parasite responsable de la leishmaniose. Ils ont constaté que les macrophages traités avec du peroxyde d'hydrogène,montre rolex oyster perpetual day date replique, un agent nuisible aux cellules, avaient augmenté l'expression d'une protéine de surface appelée PD 1 qui bloque une voie de survie cellulaire clé,replique rolex oyster perpetual, entraînant la mort cellulaire. En revanche, les macrophages infectés par L. donovani ont des niveaux inférieurs de PD 1 et les cellules ont survécu. Les chercheurs estiment que le parasite diminue l'expression de PD 1 dans les cellules hôtes pour assurer leur propre survie. L'activation de la PD 1 avec des médicaments pourrait aider à traiter la leishmaniose et d'autres maladies associées aux macrophages.
Voir l'article connexeLes résumés de recherche de la publication complète
Le numéro de mars 2016 de l'immunologie et de la biologie cellulaire contient une caractéristique spéciale sur la génomique cellulaire unique à la fine pointe et la modélisation en immunologie. L'apparition récente de la génomique cellulaire unique a offert des possibilités sans précédent de caractérisation indépendante de l'hétérogénéité cellulaire et des états réglementaires. Dans le même temps,contrefaçon montre rolex day date, les vastes ensembles de données produits par ces techniques ont souligné la nécessité de nouveaux outils de bioinformatique pour utiliser l'information contenue au maximum. Dans cette caractéristique spéciale, les méthodes expérimentales pour produire de telles données ainsi que les approches de modélisation sélectionnées sont examinées,contrefaçon oyster perpetual day date prix, en mettant l'accent sur les applications sur l'étude du système immunitaire. L'immunologie et la biologie cellulaire remercient les coordinateurs de cette spéciale Tapio L et Valentina Proserpio pour leur planification et leur contribution.
Signalisation et extinction de la quorum de la communauté
La communauté des boues floculaires a montré un taux élevé d'activité QQ, et ce taux dépendait de la longueur de la chaîne acyle démontrant la spécificité de la dégradation. Lorsque la biomasse flocculaire a été transformée en boues granulaires, l'activité QQ de la communauté a été réduite de 30%. N-acyl homosérine lactones avec quatre à huit atomes de carbone sur la chaîne acyl accumulée au stade granulaire, et leurs concentrations étaient au moins trois fois supérieures à celles du stade floculaire. Ces résultats ont corroboré l'analyse de la méta-communauté où un changement majeur dans les espèces dominantes des inhibiteurs potentiels des signaux aux producteurs a été observé lors de la transition des flocons aux granulés, indiquant le rôle de la composition des espèces et les activités de signalisation associées dans la coordination des comportements communautaires.
Conclusions: Cette étude suggère que QQ a une fonction importante dans la régulation de la signalisation QS au niveau communautaire et fournit un aperçu mécaniste du rôle de la biologie QS dans l'assemblage communautaire complexe.
Introduction Dans la plupart des écosystèmes naturels et artificiels, les bactéries résident principalement dans des communautés structurées, dans des agrégations communément appelées biofilms microbiens.1 Ces consortiums microbiens peuvent être composés de centaines à milliers d'espèces bactériennes avec des capacités métaboliques variables et affichant collectivement des propriétés au niveau communautaire distinctes de Les cellules planctoniques.2,3 La composition générale et la fonction des biofilms complexes sont généralement influencées par les interactions entre les différentes espèces microbiennes.1,3 La compréhension de la dynamique des interactions interspécifiques au sein de ces biofilms multi-espèces complexes est un défi, mais important pour contrôler Et réguler les fonctions clés de l'écosystème. Diversité des bactéries produisant et dégradant de la N-acyl homosérine lactone dans les sols et la rhizosphère du tabac. Environ Microbiol 2005; 7: 1796 1808. Promotion de la croissance des bactéries de trempe de quorum dans la rhizosphère de Solanum tuberosum. Environ Microbiol 2007; 9: 1511 1522. Le dialyse à médiation par acyl homosérine lactone parmi les bactéries épiphytes module le comportement de Pseudomonas syringae sur les feuilles. ISME J 2009; 3: 825 834. Partage des signaux de détection du quorum et du rôle des communautés interspécifiques dans une maladie bactérienne des plantes. ISME J 2011; 5 Par exemple, Burkholderia cepacia peut percevoir les AHL libérées par Pseudomonas aeruginosa en co culture, conduisant à la formation de microcolonies mixtes, contrairement à la formation de microcolonies séparées et non mixtes En l'absence d'activité QS.10 Les AHL sont également présents à des concentrations biologiquement pertinentes dans des communautés complexes dans une large gamme d'habitats, y compris les expectorations de patients atteints de fibrose kystique, 13 tapis microbiens, 14 le rumen 15 et les stations de traitement des eaux usées16,17. Les résultats suggèrent que la signalisation QS au niveau communautaire est susceptible d'être importante dans la plupart des habitats. En effet, le rôle du QS médié par l'AHL dans la formation de biofilms complexes de boues d'espèces mixtes ainsi que l'assemblage de granules microbiens a récemment été démontré dans un bioréacteur à membrane18 et Un réacteur discontinu séquentiel (SBR), 19 respectivement. Pour le SBR, on a constaté que la production in situ d'AHL spécifiques était forte et positive c Ou liés à la morphogenèse des granules microbiens. Des concentrations élevées d'AHL ont été liées à la formation de granulés, alors que les concentrations diminuées ont coïncidé avec la désintégration des granulés et la conversion aux flocs.19 Plus important encore, ces processus étaient étroitement liés à l'abondance d'une gamme diversifiée d'espèces microbiennes dans les communautés granulaires , Ce qui suggère une interaction communautaire hautement complexe fondée sur la base de l'AHL19. Cependant, il n'est pas clair comment de telles interactions peuvent être réalisées et coordonnées entre les individus, les espèces phylogénétiquement différentes, dans les communautés complexes.
Un mécanisme possible pour la régulation du comportement QS dans l'environnement est le contrôle des concentrations de signal,rolex day date or rose replique, ce qui est essentiel pour une signalisation QS efficace. Il est possible que la concentration du signal dans l'environnement puisse être régulée par une activité spécifique de dégradation du signal enzymatique ou une extinction du quorum (QQ) par les membres de la communauté. L'acyl homosérine lactone acylase de Ralstonia XJ12B représente une classe nouvelle et puissante d'enzymes de trempe de quorum. Mol Microbiol 2003; 47: 849 860. Identification d'une N-acylhomoserine lactone acylase extracellulaire à partir d'une Streptomyces sp. Et son application à la trempe de quorum. Appl Environ Microbiol 2005; 71: 2632 2641. L'enzyme codée par Rhodococcus qsdA définit une nouvelle classe de lactonases de trempe de quorum à grand spectre. Appl Environ Microbiol 2008; Le rôle écologique et l'impact de QQ sur la signalisation QS restent largement inconnus. Nous avons exploré le rôle de QQ en tant que régulateur ou modulateur de la signalisation QS de la communauté. En utilisant un complexe Le QQ dépend de l'AHL a été jugé actif et spécifique, médié par des membres de la communauté d'origines diverses. L'assemblage de la biomasse flocculaire dans les biofilms des boues granulaires était inversement corrélé avec les activités QS et QQ concurrentes de la communauté, Ce qui suggère une fonction importante de QQ dans la coordination de la signalisation et du comportement QS au niveau communautaire.
Matériaux et méthodes Opérations du secteur automobile Une SBR (1076,4 cm, diamètreheight), ensemencée avec une communauté de boues floculaires d'une usine de récupération d'eau (Ulu Pandan, Singapour), a été exploitée à 22 ° C pendant 82 semaines24. La culture des boues a été alimentée en eaux usées synthétiques (SWW) 150mg de demande d'oxygène chimique par litre d'acétate et 50mg de demande d'oxygène chimique par propionate de litre comme source de carbone, 20mg / l d'ammonium, 10mg / l d'orthophosphate et éléments nutritifs traces.25 Le bioréacteur avait un volume de travail final de 4l. L'opération du bioréacteur impliquait un cycle de 5 h avec deux étapes continues de périodes anaérobies, aérobies et anoxiques. Un volume total de 1 litre SWW a été alimenté par cycle et a entraîné un temps de rétention hydraulique de 20h. Le pH du bioréacteur a été maintenu entre 6,7 et 8,2 sous le contrôle d'un contrôleur logique programmable via un dosage de 9,12 g / l de HCl ou 10,0 g / l de NaOH. La performance du système du bioréacteur a été surveillée par des études de cycle hebdomadaires. La biomasse des boues a été immédiatement récoltée après centrifugation (5min, 8000g, 4C) et stockée à 80 ° C pour une analyse ultérieure de l'ARN. De même, des aliquotes de 50 ml d'effluents traités ont été conservées à 80 ° C immédiatement après l'échantillonnage pour une analyse plus tard de l'AHL. Aux semaines 40 44, une partie de la culture de boues floculaires du SBR a été recueillie et utilisé pour semer une seconde SBR (6200 cm de diamètre). Le second SBR a fonctionné selon le premier SBR, avec quelques modifications, pour faciliter la formation de granulés microbiens (comme décrit précédemment en détail) .19 En bref, le second SBR a fonctionné à un temps de rétention hydraulique de 12h et le temps de décantation pour Chaque cycle a été réduit de 60 à 5 min dans les 5 premières semaines de fonctionnement du réacteur.19 Les granulés ont donc été définis comme des agrégats compacts avec un diamètre de particule minimal de 100 m et un indice volumétrique des boues (SVI5, une mesure de la densité / compacité de la biomasse) de 50 ml / G ou moins, 19,27 tandis que les flocons étaient une biomasse partiellement agrégée avec un diamètre de particule de 100 m ou moins et un SVI5 d'au moins 50 ml / g.
Souches bactériennes et conditions de croissance Les biosensors AHL incluant Agrobacterium tumefaciens A136,28 Chromobacterium violaceum CV026 (réf. 29) et Escherichia coli pJBA357,30 ainsi que P. aeruginosa MH602 (réf. 31) et E. coli JM109 (réf. 32) étaient de routine Maintenu dans Luria Bertani moyen. Les antibiotiques suivants ont été complétés dans le milieu de croissance chaque fois que nécessaire: tétracycline (4,5 g / ml), spectinomycine (50 g / ml), kanamycine (50 g / ml), ampicilline (100 g / ml) ou gentamycine (40 g / ml). Les génotypes de ces souches bactériennes sont énumérés dans le tableau complémentaire S1. Des échantillons ont été prélevés de chaque microcosme à différents moments, et la biomasse des boues a été éliminée par centrifugation (10min, 8000 g). Les AHL résiduels dans le surnageant de boues ont été extraites et quantifiées par spectromètre de masse tandem en chromatographie liquide à haute performance (Shimadzu, Singapour) comme décrit ci-dessous. Les boues inactivées par la chaleur et les contrôles SWW ont été inclus. L'adsorption des AHL à la biomasse des boues a été déterminée en comparant les AHL résiduelles dans le SWW et les contrôles des boues inactivées par la chaleur, immédiatement après l'addition, ainsi qu'après 1 heure d'incubation. Le pH de chaque microcosme de boues (liquide en vrac) a été surveillé tout au long de l'étude et a varié entre 6,7 et 6,9. L'impact du pH sur l'intégrité des AHL a également été évalué en ajoutant des AHL synthétiques à SWW tamponnés à différentes valeurs de pH allant de 6,7 à 8,3. Les courbes de régression linéaires et non linéaires ont été modélisées à l'aide de Prism (GraphPad, San Diego,replique rolex oyster perpetual or, CA, USA). La demi-vie du signal a été estimée en fonction de la cinétique zéro et du premier ordre.33
Détection et quantification des AHL par spectrométrie de masse tandem en chromatographie liquide à haute performance (LC MS / MS) La détection et la quantification des AHL provenant des effluents traités par les bioréacteurs ou des surnageants de boues ont été menées comme décrit par Tan et al.19 En bref, les AHL ont été extraits et concentrés à partir des Surnageants en utilisant du dichlorométhane (Sigma Aldrich). Les extraits de dichlorométhane ont été analysés et quantifiés à l'aide d'un spectromètre de masse tandem en chromatographie liquide à haute performance (Shimadzu LCMS8030, Shimadzu). Tous les échantillons ont été chromatographiés par chromatographie liquide à haute performance (colonne Shim pack XR ODS C18) à un débit de 0,3 ml / min. La phase mobile consistait en un gradient linéaire (40 95%) du solvant B (méthanol avec 0,1% d'acide formique) et du solvant A (formiate d'ammonium 25 mM avec 0,1% d'acide formique). Les effluents ont été ionisés par ionisation par électrospray en mode positif et détectés à l'aide de l'approche de la surveillance de la réaction multiple.14,34 Des expériences de surveillance de réaction multiple associées à la matrice ont été menées pour toutes les AHL.19 Chaque profil de surveillance de la réaction multiple standard, y compris le temps de rétention de la chromatographie liquide spécifique (LC) , L'apparition de l'ion précurseur m / z et deux ions de transition, ainsi que l'intensité relative des deux ions de transition, a été utilisée comme référence. Pour confirmer l'identité des AHL putatives, un balayage complet allant de m / z 100 à 350, couplé au mode de balayage ionique précurseur, a été effectué par rapport aux AHL standard.14 Pour la quantification AHL, des courbes standard matricielles allant de 0,5 À 200g / l, ont été construits. Deux ions de transition, caractéristique des AHL respectifs, ont été utilisés pour identifier l'AHL, et l'ion de transition avec la plus haute intensité a été utilisé pour construire les courbes standard. Les zones de pointe de l'analyte ont été intégrées à l'aide de LabSolutions (Shimadzu). Les limites de détection et de quantification pour chaque AHL ont été calculées avec un rapport signal / bruit de 3,3 et 10 respectivement14. La quantité de chaque AHL putative dans l'échantillon a été calculée en fonction de la courbe standard et de l'efficacité d'extraction de l'AHL respectif. L'efficacité d'extraction pour chaque AHL a été calculée en fonction de la récupération des AHL standard ajoutés à 5 et 50 g / l à la matrice d'échantillon surnageant de boues inactivées par la chaleur. Des injections vierges ont été effectuées aux intervalles d'injection d'échantillons pour éviter le report de l'échantillon.
Isolation des membres de la communauté des boues Au total, cinq expériences indépendantes d'isolement ont été réalisées à partir des semaines 40 à 44 de l'opération du bioréacteur. Chaque fois, 20 ml d'échantillons de boues uniformément mélangées ont été prélevés sur le bioréacteur à la fin d'un cycle opérationnel. Les échantillons de boues ont été vortexés vigoureusement pendant 5 minutes pour disperser les cellules floculaires, dilués en série et étalés sur les milieux de culture suivants: bouillon nutritif, R2A, isolation de Pseudomonas, SWW et ABT35 supplémentés avec 1,5% (p / v) d'agar chacun. Les plaques ont été incubées à 22 ° C pendant 5 jours. Le test biologique Tumefaciens A136, l'agar-indicateur ABT agar35 avec 50 g / ml de 5 bromo 4 chloro 3 indolyl b D galactopyranoside (X gal) a été préparé, tandis que la gélose Luria Bertani a été utilisée pour l'essai biologique CV026 de C. violaceum. Dix microlitres de cultures nocturnes de biosensors ont été repérés sur les plaques indicatrices, tandis que 10 l de cultures d'isolats d'une nuit ont été placés à 5 mm de l'endroit du biocapteur et incubés à 30 ° C pendant 48 heures. Les AHL produites in situ ont été détectées à l'aide du biosensor E. coli JBA357. En bref, 100l de 5 E. dilué pendant 4 h avant l'examen par microscope à balayage laser confocal (Zeiss LSM 710, Carl Zeiss Pte. Ltd., Singapour) à une longueur d'onde d'excitation / émission de 488/522 535 nm. E. coli JM109, P. aeruginosa MH602 et AHL synthétiques ont été inclus comme témoins. Pour 2h. Après la centrifugation et la stérilisation ultraviolette, les AHL résiduels ont été quantifiés à l'aide de l'essai biologique A. tumefaciens A136.38,39 En bref, six barres d'agar de 1 cm chacune ont été sécréties de manière aseptique à partir des plaques témoins ABT. Cinq microlitres d'échantillons ont été repérés à une extrémité des barres d'agar. Environ 0,5l de culture de nuit de A. tumefaciens A136 a été repéré progressivement à d'autres distances des échantillons chargés. Les plaques ont été incubées à 30 ° C pendant 24h. Les AHL ont été ajoutés à Luria Bertani à pH 6,7, 7,2 et 10,2, et les cultures de E. coli JM109 ont été incluses comme témoins. Le pH de toutes les cultures de nuit a été déterminé pour être l'analyse de séquençage d'ARN. L'ARN total a été extrait de boues en utilisant FastRNA Pro Soil Direct kit (MP Biomedicals, Singapour) selon les directives du fabricant. L'ARN extrait a été soumis à un prélèvement d'ADN en utilisant le kit TURBO DNA free (Applied Biosystems). L'ARN total, 200 nd, a été utilisé pour la préparation complémentaire de la bibliothèque d'ADN selon les instructions du fabricant (Illumina, Singapour). Chaque bibliothèque d'ADN complémentaire a été ligaturée avec une séquence d'adaptateur unique pour le multiplexage d'échantillon. Au total, 16 bibliothèques d'ADN complémentaires différentes ont été regroupées et séquencées par MiSeq System (Illumina). Les données de séquençage de l'ARN ont été analysées à l'aide d'une méthode à balise rapide comme décrit.19 En bref, une amorce universelle (5 CGACRRCCATGCANCACCT 3) pour la région hypervariable 16S rARN (V6) a été utilisée pour analyser chaque séquence de lecture pour obtenir les 33 séquences d'étiquettes nucléotidiques en aval De l'amorce, et les 33 séquences nucléotidiques sont définies comme la marque V6 du gène 16S rRNA. L'amorce universelle correspond à 94% des séquences d'ARNr 16S dans la base de données RDP.41 Pour éliminer les marques V6 dérivées d'erreur de séquençage, seules les balises V6 qui ont été observées dans au moins deux lectures différentes ont été conservées pour analyse. En outre, les étiquettes V6 ont été supprimées lorsqu'un seul type de lecture séquentielle représentait 50% de toutes les lectures couvrant cette étiquette V6. Cela a été fait pour éliminer les artefacts de séquençage où des lectures doubles identiques ont été générées à partir de modèles uniques. Les tests de comparaison multiple de Holm Sidak ont été effectués pour comparer les demi-vies d'AHL dans différents échantillons ou pour examiner l'expression de l'AHL entre différents échantillons de boues. Les coefficients de corrélation de Pearson ont été déterminés et de fausses corrections de taux de découverte ont été faites pour toutes les corrélations multiples. Ont été regroupés en utilisant une méthode de clustering hiérarchique non supervisée basée sur la distance Euclidienne avec une liaison complète codée par Cluster 3.0 et visualisée à l'aide de Java TreeView (Open Source Clustering Software, Tokyo, Japon).
Résultats La communauté de boues floculaires dégrade les AHL différentiellement en fonction de la longueur de la chaîne acylique. Un bioréacteur communautaire hautement diversifié de boues floculaires subissant une nitrification simultanée, une dénitrification et une élimination du phosphore a été utilisé comme système expérimental (figure supplémentaire S1). Pour déterminer si l'activité QQ spécifique de l'AHL était présente dans ce système modèle, les AHL synthétiques ont été ajoutés individuellement ou en mélange aux boues floculaires pour caractériser les taux de dégradation du signal. Environ 10 30% des AHL ont été perdus en raison de l'adsorption à la biomasse, tandis que la perte des 70 90% restants du signal a été attribuée à l'activité biologique (Figure supplémentaire S2). Ceci était évident par les demi-vies AHL sensiblement plus courtes en présence de boues vivantes que lorsqu'elles étaient incubées en présence de boues inactivées par la chaleur (PFigure 1). En présence de boues vivantes, la demi-vie du signal était inversement proportionnelle à la longueur de la chaîne acylique, indépendamment de la substitution en position C3 (Figure 1). Par exemple, la demi-vie pour les signaux à chaîne courte C6 HSL et 3OC6 HSL était respectivement de 1.950.45 et 2.570.29h, alors que les demi-vies des signaux à chaîne longue C12 HSL et 3OC12 HSL étaient considérablement plus courtes à 0.790.08 et 0.660. 06h, respectivement. Le pH du microcosme des boues vivantes était cohérent à 6,7 6,9 et les données pour les contrôles tampons SWW indiquaient qu'il y avait une faible dégradation spontanée des AHL entre des valeurs de pH de 6,7 8,3 (figure supplémentaire S3). Par conséquent, il est probable que la perte d'AHL observée ici est due à une digestion enzymatique active plutôt qu'à une dégradation chimique passive.
Figure 1 Dégradation des lactosacérases d'homosérine N (AHL) en fonction de la fonction de la longueur de chaîne acyl dans les boues floculaires. La valeur de dégradation est exprimée en demi-vie de signal. Un mélange d'acides gras non substitués (a) et oxo-substitués (b) a été ajouté aux boues vivantes (cercle ouvert) ou à la chaleur inactivée (cercle solide) à une concentration finale de 5 M pour chaque AHL. Le pH de chaque mélange de boues (liquide en vrac) a été surveillé tout au long de l'étude et variait entre pH 6,7 et 6,9. Les AHL résiduelles ont été extraites et quantifiées à l'aide de LC MS / MS à différents moments. La demi-vie du signal pour chaque AHL a été estimée en fonction de la cinétique de l'ordre zéro ou du premier ordre. (N = 3, répliques biologiques). Des tests t multiples de Holm Sidak ont été effectués (contrôle inactivé en fonction de la durée de vie par rapport à la chaleur pour chaque AHL) et des valeurs de P corrigées (P
Une proportion significative des membres de la communauté des boues floculaires produisent ou calment les AHL afin de mieux comprendre les relations entre la spécificité de l'activité QQ et la production de signal dans la communauté des boues floculaires, 307 souches de bactéries et 23 souches de champignons, correspondant à 50 bactéries Et quatre genres fongiques ont été isolés et testés pour leur capacité à produire ou à dégrader les AHL (Tableau supplémentaire S2). Les isolats bactériens représentaient 3,5% des membres de la communauté totale identifiés par séquençage de l'ARN (tableaux supplémentaires S3 et 4). La production d'AHL a été principalement évaluée en fonction de l'activation de différents biosensors, y compris E. coli JBA357,30 A. tumefaciens A13628 et C. violaceum CV026.29 Le profil AHL de chaque producteur de signal putatif a ensuite été déterminé en utilisant LC MS / MS. La dégradation de l'AHL a été testée en utilisant des AHL avec des chaînes acyle courtes (3OC6 HSL), moyenne (3OC8 HSL) et lonely (3OC12 HSL). Une grande proportion d'isolats de boues floculaires, soit 65%, étaient des producteurs de signaux AHL ou des extincteurs (figure 2). Bien que seulement 10% des isolats puissent produire des AHL, jusqu'à 58,1% des isolats ont réussi à étancher au moins une des AHL examinées. Une proportion relativement faible des isolats,rolex oyster femme contrefaçon, de 4,8%, a produit et désactivé des AHL. Les 36,7% restants des isolats n'ont ni produit ni désactivé les AHL. Tous les extincteurs AHL étaient capables d'inactiver l'AHL à longue chaîne, 3OC12 HSL. Bien que 77% des extincteurs n'aient pu que dégrader les AHL à longue chaîne, 23% pourraient dégrader les AHL à longue chaîne ainsi que les AHL à chaîne courte ou moyenne.
Figure 2Distribution des isolats en fonction de leur capacité à produire et / ou énerrer les lactones homosérine N acyl (AHL). Au total, 330 isolats, dont 307 et 23 souches d'origine bactérienne et fongique,rolex datejust 2 fond noir faux, ont été cultivés à partir de la communauté des boues floculaires pendant l'opération du bioréacteur à partir des semaines 40 44. Tous les isolats ont été criblés pour la production d'AHL par différents bilans biologiques et LC MS / MS , Ainsi que pour leur capacité à étancher 5M d'AHL avec des chaînes d'acyle courtes (3OC6 HSL), moyennes (3OC8 HSL) et longue (3OC12 HSL) après 2h d'incubation. Les AHL résiduels ont été quantifiés à l'aide de l'essai biologique à base d'agar A. tumefaciens A136.Les membres de la communauté AHL qui trempe sont p
La communauté des boues floculaires a montré un taux élevé d'activité QQ, et ce taux dépendait de la longueur de la chaîne acyle démontrant la spécificité de la dégradation. Lorsque la biomasse flocculaire a été transformée en boues granulaires, l'activité QQ de la communauté a été réduite de 30%. N-acyl homosérine lactones avec quatre à huit atomes de carbone sur la chaîne acyl accumulée au stade granulaire, et leurs concentrations étaient au moins trois fois supérieures à celles du stade floculaire. Ces résultats ont corroboré l'analyse de la méta-communauté où un changement majeur dans les espèces dominantes des inhibiteurs potentiels des signaux aux producteurs a été observé lors de la transition des flocons aux granulés, indiquant le rôle de la composition des espèces et les activités de signalisation associées dans la coordination des comportements communautaires.
Conclusions: Cette étude suggère que QQ a une fonction importante dans la régulation de la signalisation QS au niveau communautaire et fournit un aperçu mécaniste du rôle de la biologie QS dans l'assemblage communautaire complexe.
Introduction Dans la plupart des écosystèmes naturels et artificiels, les bactéries résident principalement dans des communautés structurées, dans des agrégations communément appelées biofilms microbiens.1 Ces consortiums microbiens peuvent être composés de centaines à milliers d'espèces bactériennes avec des capacités métaboliques variables et affichant collectivement des propriétés au niveau communautaire distinctes de Les cellules planctoniques.2,3 La composition générale et la fonction des biofilms complexes sont généralement influencées par les interactions entre les différentes espèces microbiennes.1,3 La compréhension de la dynamique des interactions interspécifiques au sein de ces biofilms multi-espèces complexes est un défi, mais important pour contrôler Et réguler les fonctions clés de l'écosystème. Diversité des bactéries produisant et dégradant de la N-acyl homosérine lactone dans les sols et la rhizosphère du tabac. Environ Microbiol 2005; 7: 1796 1808. Promotion de la croissance des bactéries de trempe de quorum dans la rhizosphère de Solanum tuberosum. Environ Microbiol 2007; 9: 1511 1522. Le dialyse à médiation par acyl homosérine lactone parmi les bactéries épiphytes module le comportement de Pseudomonas syringae sur les feuilles. ISME J 2009; 3: 825 834. Partage des signaux de détection du quorum et du rôle des communautés interspécifiques dans une maladie bactérienne des plantes. ISME J 2011; 5 Par exemple, Burkholderia cepacia peut percevoir les AHL libérées par Pseudomonas aeruginosa en co culture, conduisant à la formation de microcolonies mixtes, contrairement à la formation de microcolonies séparées et non mixtes En l'absence d'activité QS.10 Les AHL sont également présents à des concentrations biologiquement pertinentes dans des communautés complexes dans une large gamme d'habitats, y compris les expectorations de patients atteints de fibrose kystique, 13 tapis microbiens, 14 le rumen 15 et les stations de traitement des eaux usées16,17. Les résultats suggèrent que la signalisation QS au niveau communautaire est susceptible d'être importante dans la plupart des habitats. En effet, le rôle du QS médié par l'AHL dans la formation de biofilms complexes de boues d'espèces mixtes ainsi que l'assemblage de granules microbiens a récemment été démontré dans un bioréacteur à membrane18 et Un réacteur discontinu séquentiel (SBR), 19 respectivement. Pour le SBR, on a constaté que la production in situ d'AHL spécifiques était forte et positive c Ou liés à la morphogenèse des granules microbiens. Des concentrations élevées d'AHL ont été liées à la formation de granulés, alors que les concentrations diminuées ont coïncidé avec la désintégration des granulés et la conversion aux flocs.19 Plus important encore, ces processus étaient étroitement liés à l'abondance d'une gamme diversifiée d'espèces microbiennes dans les communautés granulaires , Ce qui suggère une interaction communautaire hautement complexe fondée sur la base de l'AHL19. Cependant, il n'est pas clair comment de telles interactions peuvent être réalisées et coordonnées entre les individus, les espèces phylogénétiquement différentes, dans les communautés complexes.
Un mécanisme possible pour la régulation du comportement QS dans l'environnement est le contrôle des concentrations de signal,rolex day date or rose replique, ce qui est essentiel pour une signalisation QS efficace. Il est possible que la concentration du signal dans l'environnement puisse être régulée par une activité spécifique de dégradation du signal enzymatique ou une extinction du quorum (QQ) par les membres de la communauté. L'acyl homosérine lactone acylase de Ralstonia XJ12B représente une classe nouvelle et puissante d'enzymes de trempe de quorum. Mol Microbiol 2003; 47: 849 860. Identification d'une N-acylhomoserine lactone acylase extracellulaire à partir d'une Streptomyces sp. Et son application à la trempe de quorum. Appl Environ Microbiol 2005; 71: 2632 2641. L'enzyme codée par Rhodococcus qsdA définit une nouvelle classe de lactonases de trempe de quorum à grand spectre. Appl Environ Microbiol 2008; Le rôle écologique et l'impact de QQ sur la signalisation QS restent largement inconnus. Nous avons exploré le rôle de QQ en tant que régulateur ou modulateur de la signalisation QS de la communauté. En utilisant un complexe Le QQ dépend de l'AHL a été jugé actif et spécifique, médié par des membres de la communauté d'origines diverses. L'assemblage de la biomasse flocculaire dans les biofilms des boues granulaires était inversement corrélé avec les activités QS et QQ concurrentes de la communauté, Ce qui suggère une fonction importante de QQ dans la coordination de la signalisation et du comportement QS au niveau communautaire.
Matériaux et méthodes Opérations du secteur automobile Une SBR (1076,4 cm, diamètreheight), ensemencée avec une communauté de boues floculaires d'une usine de récupération d'eau (Ulu Pandan, Singapour), a été exploitée à 22 ° C pendant 82 semaines24. La culture des boues a été alimentée en eaux usées synthétiques (SWW) 150mg de demande d'oxygène chimique par litre d'acétate et 50mg de demande d'oxygène chimique par propionate de litre comme source de carbone, 20mg / l d'ammonium, 10mg / l d'orthophosphate et éléments nutritifs traces.25 Le bioréacteur avait un volume de travail final de 4l. L'opération du bioréacteur impliquait un cycle de 5 h avec deux étapes continues de périodes anaérobies, aérobies et anoxiques. Un volume total de 1 litre SWW a été alimenté par cycle et a entraîné un temps de rétention hydraulique de 20h. Le pH du bioréacteur a été maintenu entre 6,7 et 8,2 sous le contrôle d'un contrôleur logique programmable via un dosage de 9,12 g / l de HCl ou 10,0 g / l de NaOH. La performance du système du bioréacteur a été surveillée par des études de cycle hebdomadaires. La biomasse des boues a été immédiatement récoltée après centrifugation (5min, 8000g, 4C) et stockée à 80 ° C pour une analyse ultérieure de l'ARN. De même, des aliquotes de 50 ml d'effluents traités ont été conservées à 80 ° C immédiatement après l'échantillonnage pour une analyse plus tard de l'AHL. Aux semaines 40 44, une partie de la culture de boues floculaires du SBR a été recueillie et utilisé pour semer une seconde SBR (6200 cm de diamètre). Le second SBR a fonctionné selon le premier SBR, avec quelques modifications, pour faciliter la formation de granulés microbiens (comme décrit précédemment en détail) .19 En bref, le second SBR a fonctionné à un temps de rétention hydraulique de 12h et le temps de décantation pour Chaque cycle a été réduit de 60 à 5 min dans les 5 premières semaines de fonctionnement du réacteur.19 Les granulés ont donc été définis comme des agrégats compacts avec un diamètre de particule minimal de 100 m et un indice volumétrique des boues (SVI5, une mesure de la densité / compacité de la biomasse) de 50 ml / G ou moins, 19,27 tandis que les flocons étaient une biomasse partiellement agrégée avec un diamètre de particule de 100 m ou moins et un SVI5 d'au moins 50 ml / g.
Souches bactériennes et conditions de croissance Les biosensors AHL incluant Agrobacterium tumefaciens A136,28 Chromobacterium violaceum CV026 (réf. 29) et Escherichia coli pJBA357,30 ainsi que P. aeruginosa MH602 (réf. 31) et E. coli JM109 (réf. 32) étaient de routine Maintenu dans Luria Bertani moyen. Les antibiotiques suivants ont été complétés dans le milieu de croissance chaque fois que nécessaire: tétracycline (4,5 g / ml), spectinomycine (50 g / ml), kanamycine (50 g / ml), ampicilline (100 g / ml) ou gentamycine (40 g / ml). Les génotypes de ces souches bactériennes sont énumérés dans le tableau complémentaire S1. Des échantillons ont été prélevés de chaque microcosme à différents moments, et la biomasse des boues a été éliminée par centrifugation (10min, 8000 g). Les AHL résiduels dans le surnageant de boues ont été extraites et quantifiées par spectromètre de masse tandem en chromatographie liquide à haute performance (Shimadzu, Singapour) comme décrit ci-dessous. Les boues inactivées par la chaleur et les contrôles SWW ont été inclus. L'adsorption des AHL à la biomasse des boues a été déterminée en comparant les AHL résiduelles dans le SWW et les contrôles des boues inactivées par la chaleur, immédiatement après l'addition, ainsi qu'après 1 heure d'incubation. Le pH de chaque microcosme de boues (liquide en vrac) a été surveillé tout au long de l'étude et a varié entre 6,7 et 6,9. L'impact du pH sur l'intégrité des AHL a également été évalué en ajoutant des AHL synthétiques à SWW tamponnés à différentes valeurs de pH allant de 6,7 à 8,3. Les courbes de régression linéaires et non linéaires ont été modélisées à l'aide de Prism (GraphPad, San Diego,replique rolex oyster perpetual or, CA, USA). La demi-vie du signal a été estimée en fonction de la cinétique zéro et du premier ordre.33
Détection et quantification des AHL par spectrométrie de masse tandem en chromatographie liquide à haute performance (LC MS / MS) La détection et la quantification des AHL provenant des effluents traités par les bioréacteurs ou des surnageants de boues ont été menées comme décrit par Tan et al.19 En bref, les AHL ont été extraits et concentrés à partir des Surnageants en utilisant du dichlorométhane (Sigma Aldrich). Les extraits de dichlorométhane ont été analysés et quantifiés à l'aide d'un spectromètre de masse tandem en chromatographie liquide à haute performance (Shimadzu LCMS8030, Shimadzu). Tous les échantillons ont été chromatographiés par chromatographie liquide à haute performance (colonne Shim pack XR ODS C18) à un débit de 0,3 ml / min. La phase mobile consistait en un gradient linéaire (40 95%) du solvant B (méthanol avec 0,1% d'acide formique) et du solvant A (formiate d'ammonium 25 mM avec 0,1% d'acide formique). Les effluents ont été ionisés par ionisation par électrospray en mode positif et détectés à l'aide de l'approche de la surveillance de la réaction multiple.14,34 Des expériences de surveillance de réaction multiple associées à la matrice ont été menées pour toutes les AHL.19 Chaque profil de surveillance de la réaction multiple standard, y compris le temps de rétention de la chromatographie liquide spécifique (LC) , L'apparition de l'ion précurseur m / z et deux ions de transition, ainsi que l'intensité relative des deux ions de transition, a été utilisée comme référence. Pour confirmer l'identité des AHL putatives, un balayage complet allant de m / z 100 à 350, couplé au mode de balayage ionique précurseur, a été effectué par rapport aux AHL standard.14 Pour la quantification AHL, des courbes standard matricielles allant de 0,5 À 200g / l, ont été construits. Deux ions de transition, caractéristique des AHL respectifs, ont été utilisés pour identifier l'AHL, et l'ion de transition avec la plus haute intensité a été utilisé pour construire les courbes standard. Les zones de pointe de l'analyte ont été intégrées à l'aide de LabSolutions (Shimadzu). Les limites de détection et de quantification pour chaque AHL ont été calculées avec un rapport signal / bruit de 3,3 et 10 respectivement14. La quantité de chaque AHL putative dans l'échantillon a été calculée en fonction de la courbe standard et de l'efficacité d'extraction de l'AHL respectif. L'efficacité d'extraction pour chaque AHL a été calculée en fonction de la récupération des AHL standard ajoutés à 5 et 50 g / l à la matrice d'échantillon surnageant de boues inactivées par la chaleur. Des injections vierges ont été effectuées aux intervalles d'injection d'échantillons pour éviter le report de l'échantillon.
Isolation des membres de la communauté des boues Au total, cinq expériences indépendantes d'isolement ont été réalisées à partir des semaines 40 à 44 de l'opération du bioréacteur. Chaque fois, 20 ml d'échantillons de boues uniformément mélangées ont été prélevés sur le bioréacteur à la fin d'un cycle opérationnel. Les échantillons de boues ont été vortexés vigoureusement pendant 5 minutes pour disperser les cellules floculaires, dilués en série et étalés sur les milieux de culture suivants: bouillon nutritif, R2A, isolation de Pseudomonas, SWW et ABT35 supplémentés avec 1,5% (p / v) d'agar chacun. Les plaques ont été incubées à 22 ° C pendant 5 jours. Le test biologique Tumefaciens A136, l'agar-indicateur ABT agar35 avec 50 g / ml de 5 bromo 4 chloro 3 indolyl b D galactopyranoside (X gal) a été préparé, tandis que la gélose Luria Bertani a été utilisée pour l'essai biologique CV026 de C. violaceum. Dix microlitres de cultures nocturnes de biosensors ont été repérés sur les plaques indicatrices, tandis que 10 l de cultures d'isolats d'une nuit ont été placés à 5 mm de l'endroit du biocapteur et incubés à 30 ° C pendant 48 heures. Les AHL produites in situ ont été détectées à l'aide du biosensor E. coli JBA357. En bref, 100l de 5 E. dilué pendant 4 h avant l'examen par microscope à balayage laser confocal (Zeiss LSM 710, Carl Zeiss Pte. Ltd., Singapour) à une longueur d'onde d'excitation / émission de 488/522 535 nm. E. coli JM109, P. aeruginosa MH602 et AHL synthétiques ont été inclus comme témoins. Pour 2h. Après la centrifugation et la stérilisation ultraviolette, les AHL résiduels ont été quantifiés à l'aide de l'essai biologique A. tumefaciens A136.38,39 En bref, six barres d'agar de 1 cm chacune ont été sécréties de manière aseptique à partir des plaques témoins ABT. Cinq microlitres d'échantillons ont été repérés à une extrémité des barres d'agar. Environ 0,5l de culture de nuit de A. tumefaciens A136 a été repéré progressivement à d'autres distances des échantillons chargés. Les plaques ont été incubées à 30 ° C pendant 24h. Les AHL ont été ajoutés à Luria Bertani à pH 6,7, 7,2 et 10,2, et les cultures de E. coli JM109 ont été incluses comme témoins. Le pH de toutes les cultures de nuit a été déterminé pour être l'analyse de séquençage d'ARN. L'ARN total a été extrait de boues en utilisant FastRNA Pro Soil Direct kit (MP Biomedicals, Singapour) selon les directives du fabricant. L'ARN extrait a été soumis à un prélèvement d'ADN en utilisant le kit TURBO DNA free (Applied Biosystems). L'ARN total, 200 nd, a été utilisé pour la préparation complémentaire de la bibliothèque d'ADN selon les instructions du fabricant (Illumina, Singapour). Chaque bibliothèque d'ADN complémentaire a été ligaturée avec une séquence d'adaptateur unique pour le multiplexage d'échantillon. Au total, 16 bibliothèques d'ADN complémentaires différentes ont été regroupées et séquencées par MiSeq System (Illumina). Les données de séquençage de l'ARN ont été analysées à l'aide d'une méthode à balise rapide comme décrit.19 En bref, une amorce universelle (5 CGACRRCCATGCANCACCT 3) pour la région hypervariable 16S rARN (V6) a été utilisée pour analyser chaque séquence de lecture pour obtenir les 33 séquences d'étiquettes nucléotidiques en aval De l'amorce, et les 33 séquences nucléotidiques sont définies comme la marque V6 du gène 16S rRNA. L'amorce universelle correspond à 94% des séquences d'ARNr 16S dans la base de données RDP.41 Pour éliminer les marques V6 dérivées d'erreur de séquençage, seules les balises V6 qui ont été observées dans au moins deux lectures différentes ont été conservées pour analyse. En outre, les étiquettes V6 ont été supprimées lorsqu'un seul type de lecture séquentielle représentait 50% de toutes les lectures couvrant cette étiquette V6. Cela a été fait pour éliminer les artefacts de séquençage où des lectures doubles identiques ont été générées à partir de modèles uniques. Les tests de comparaison multiple de Holm Sidak ont été effectués pour comparer les demi-vies d'AHL dans différents échantillons ou pour examiner l'expression de l'AHL entre différents échantillons de boues. Les coefficients de corrélation de Pearson ont été déterminés et de fausses corrections de taux de découverte ont été faites pour toutes les corrélations multiples. Ont été regroupés en utilisant une méthode de clustering hiérarchique non supervisée basée sur la distance Euclidienne avec une liaison complète codée par Cluster 3.0 et visualisée à l'aide de Java TreeView (Open Source Clustering Software, Tokyo, Japon).
Résultats La communauté de boues floculaires dégrade les AHL différentiellement en fonction de la longueur de la chaîne acylique. Un bioréacteur communautaire hautement diversifié de boues floculaires subissant une nitrification simultanée, une dénitrification et une élimination du phosphore a été utilisé comme système expérimental (figure supplémentaire S1). Pour déterminer si l'activité QQ spécifique de l'AHL était présente dans ce système modèle, les AHL synthétiques ont été ajoutés individuellement ou en mélange aux boues floculaires pour caractériser les taux de dégradation du signal. Environ 10 30% des AHL ont été perdus en raison de l'adsorption à la biomasse, tandis que la perte des 70 90% restants du signal a été attribuée à l'activité biologique (Figure supplémentaire S2). Ceci était évident par les demi-vies AHL sensiblement plus courtes en présence de boues vivantes que lorsqu'elles étaient incubées en présence de boues inactivées par la chaleur (PFigure 1). En présence de boues vivantes, la demi-vie du signal était inversement proportionnelle à la longueur de la chaîne acylique, indépendamment de la substitution en position C3 (Figure 1). Par exemple, la demi-vie pour les signaux à chaîne courte C6 HSL et 3OC6 HSL était respectivement de 1.950.45 et 2.570.29h, alors que les demi-vies des signaux à chaîne longue C12 HSL et 3OC12 HSL étaient considérablement plus courtes à 0.790.08 et 0.660. 06h, respectivement. Le pH du microcosme des boues vivantes était cohérent à 6,7 6,9 et les données pour les contrôles tampons SWW indiquaient qu'il y avait une faible dégradation spontanée des AHL entre des valeurs de pH de 6,7 8,3 (figure supplémentaire S3). Par conséquent, il est probable que la perte d'AHL observée ici est due à une digestion enzymatique active plutôt qu'à une dégradation chimique passive.
Figure 1 Dégradation des lactosacérases d'homosérine N (AHL) en fonction de la fonction de la longueur de chaîne acyl dans les boues floculaires. La valeur de dégradation est exprimée en demi-vie de signal. Un mélange d'acides gras non substitués (a) et oxo-substitués (b) a été ajouté aux boues vivantes (cercle ouvert) ou à la chaleur inactivée (cercle solide) à une concentration finale de 5 M pour chaque AHL. Le pH de chaque mélange de boues (liquide en vrac) a été surveillé tout au long de l'étude et variait entre pH 6,7 et 6,9. Les AHL résiduelles ont été extraites et quantifiées à l'aide de LC MS / MS à différents moments. La demi-vie du signal pour chaque AHL a été estimée en fonction de la cinétique de l'ordre zéro ou du premier ordre. (N = 3, répliques biologiques). Des tests t multiples de Holm Sidak ont été effectués (contrôle inactivé en fonction de la durée de vie par rapport à la chaleur pour chaque AHL) et des valeurs de P corrigées (P
Une proportion significative des membres de la communauté des boues floculaires produisent ou calment les AHL afin de mieux comprendre les relations entre la spécificité de l'activité QQ et la production de signal dans la communauté des boues floculaires, 307 souches de bactéries et 23 souches de champignons, correspondant à 50 bactéries Et quatre genres fongiques ont été isolés et testés pour leur capacité à produire ou à dégrader les AHL (Tableau supplémentaire S2). Les isolats bactériens représentaient 3,5% des membres de la communauté totale identifiés par séquençage de l'ARN (tableaux supplémentaires S3 et 4). La production d'AHL a été principalement évaluée en fonction de l'activation de différents biosensors, y compris E. coli JBA357,30 A. tumefaciens A13628 et C. violaceum CV026.29 Le profil AHL de chaque producteur de signal putatif a ensuite été déterminé en utilisant LC MS / MS. La dégradation de l'AHL a été testée en utilisant des AHL avec des chaînes acyle courtes (3OC6 HSL), moyenne (3OC8 HSL) et lonely (3OC12 HSL). Une grande proportion d'isolats de boues floculaires, soit 65%, étaient des producteurs de signaux AHL ou des extincteurs (figure 2). Bien que seulement 10% des isolats puissent produire des AHL, jusqu'à 58,1% des isolats ont réussi à étancher au moins une des AHL examinées. Une proportion relativement faible des isolats,rolex oyster femme contrefaçon, de 4,8%, a produit et désactivé des AHL. Les 36,7% restants des isolats n'ont ni produit ni désactivé les AHL. Tous les extincteurs AHL étaient capables d'inactiver l'AHL à longue chaîne, 3OC12 HSL. Bien que 77% des extincteurs n'aient pu que dégrader les AHL à longue chaîne, 23% pourraient dégrader les AHL à longue chaîne ainsi que les AHL à chaîne courte ou moyenne.
Figure 2Distribution des isolats en fonction de leur capacité à produire et / ou énerrer les lactones homosérine N acyl (AHL). Au total, 330 isolats, dont 307 et 23 souches d'origine bactérienne et fongique,rolex datejust 2 fond noir faux, ont été cultivés à partir de la communauté des boues floculaires pendant l'opération du bioréacteur à partir des semaines 40 44. Tous les isolats ont été criblés pour la production d'AHL par différents bilans biologiques et LC MS / MS , Ainsi que pour leur capacité à étancher 5M d'AHL avec des chaînes d'acyle courtes (3OC6 HSL), moyennes (3OC8 HSL) et longue (3OC12 HSL) après 2h d'incubation. Les AHL résiduels ont été quantifiés à l'aide de l'essai biologique à base d'agar A. tumefaciens A136.Les membres de la communauté AHL qui trempe sont p
Trance de danse
À l'œil non formé,montre rolex femme oyster perpetual contrefaçon, il pourrait ressembler à un croisement entre la danse de poulet et un robot piétinant. Mais pour les jeunes nightclubbers qui passent de nombreuses heures à maîtriser, le Melbourne Shuffle est une forme d'art et reconnu dans les cercles de danse internationaux comme Melbourne.
'Dans la piste de danse, Melburnians devient fou', dit Sarah Mitchell, 27 ans, de St Kilda. 'Ils ont ce style de danse appelé Melbourne shuffle et ils sortent.'
Alistair Weddell, 22 ans, est d'accord. Il a découvert le shuffle à Hard Kandy, un événement de danse du vendredi soir dans la ville, après qu'une blessure au mollet l'a amené ici en Nouvelle-Zélande pour une opération chirurgicale il y a deux ans. Weddell,replique rolex oyster perpetual or, qui vit maintenant à Melbourne, dit que le shuffle est «le style de danse le plus novateur qui existe depuis le breakdancing. Il est tellement plus pertinent pour les jeunes que toute autre danse que je connais»,rolex femme datejust faux, dit-il.
Les Européens ont tendance à danser des hanches, dit Smith, qui vit aujourd'hui à Londres. Dans les clubs techno et trance de Melbourne, où le shuffle est le plus commun, il s'agit des pieds.
Le shuffle est un mouvement rapide du talon et du pied, couplé à une action de bras correspondante. Alors que la danse est une forme libre (aucune autre personne ne se distingue exactement de la même manière), l'étape de base consiste à mélanger à plusieurs reprises vos pieds vers l'intérieur, puis vers l'extérieur, en poussant les bras vers le haut et vers le bas, ou côte à côte, dans le temps avec le rythme. Le haut du corps continue à 'bop' avec la musique.
Avec la pratique, les shufflers peuvent ajouter un spin de 360 degrés,contrefaçon oyster perpetual day date prix, une étape ou deux de côté chic, et même un saut à double pied pour faire correspondre les pics de la musique. La poudre de talc est parfois saupoudrée sur le sol, de sorte que les danseurs peuvent glisser et glisser plus rapidement lorsqu'ils mélangent. Il y a même une compétition, le Shuffle Off, qui se tient à Melbourne tous les quelques mois.
Le shuffle est une des raisons pour lesquelles, pour les milliers de personnes de Melbourne qui font la boite de nuit chaque semaine, cette ville possède une culture de danse unique. Plus de 100 clubs, mais pas tous dans le quartier central des affaires et les banlieues intérieures, s'adressent à la scène de la danse électronique.
D'autres événements tels que les raves ou les parties de danse en plein air peuvent être organisés n'importe où: dans les stades, sur les terrains vacants sous le pont de West Gate et dans les enclos du pays. Les épreuves de danse de pays sont connues sous le nom de 'dofus de buissons', car c'est ce à quoi ressemble le battement. Il y a dix ans, un bon élan ne dessinait pas plus de 400 personnes 'qui connaissaient réellement la techno', explique Richie McNeil, un DJ , Promoteur du parti de danse et, selon le mythe urbain, l'un des créateurs du shuffle.
Les évènements tels que Summadayze, célébrés le Jour de l'An et les Deux Tribus, organisés à l'Arena Rod Laver le week-end de la fête du Travail, peuvent attirer des foules allant jusqu'à 20 000.
La saison des fêtes d'été de Melbourne a débuté samedi dernier lorsque 7500 personnes sont allées à Earthcore dans un cratère volcanique près d'Ararat.
Il y a beaucoup d'argent dans la danse. Les DJs volent en provenance de Grande-Bretagne ou d'Europe pour les grandes fêtes et peuvent gagner jusqu'à 40 000 $ par nuit.
Andy Van, de Frankston, fait partie du duo de danse Madison Avenue, dont le single, Don 't Call Me Baby, a dépassé les charts britanniques il y a deux ans. Il dit que Melbourne se classe comme l'une des meilleures capitales de danse du monde.
'Vous allez à Ibiza, à Londres, en Europe, à Los Angeles et en Australie. Chaque DJ freaking dans le monde veut venir et travailler en Australie le Nouvel An.
Pete Tong, Roger Sanchez, Fatboy Slim, ils l'aiment tous ici. '
Entrepreneur Michael Gudinski, qui a fait son nom dans le rock australien, a reniflé le vent.
En 1998, il a vendu sa société, Mushroom Records, a relégué ses sorties rock et pop à son label de boutique, Liberation, et a créé une nouvelle société, l'agent Mad, pour présenter des DJ internationaux.
Pendant ce temps, la vieille étiquette de Gudinski maintenant appelée Festival Mushroom Records et appartenant à News Limited a également évolué vers la danse.
'Traditionnellement, nous avons été un label rock, et nous voulions nous diversifier un peu', a déclaré Michael Parisi, directeur général de Festival Mushroom. 'Il y avait un trou gigantesque pour la danse dans cette entreprise'.
Gudinski dit que «dans les boîtes de nuit et en travaillant avec les importations, je pouvais voir la musique de danse grandir et je l'ai très très bien pris très tôt'.
Personnellement, il n'est pas un converti complet, il préfère toujours le rock and roll.
'Je suis toujours en attente de l'acte qui capture vraiment le buzz et l'ambiance de la danse'.
Pourtant, le changement de Gudinski montre combien la scène de la danse a changé dans une dizaine d'années depuis qu'elle a pris de l'ampleur sur Melbourne. La foule est plus grande, plus diversifiée et plus jeune. Les événements sont souvent plus commerciaux et les prix des billets pour les deux clubs et Les grandes fêtes de danse ont grimpé en flèche. Il y a cinq ans, les billets de danse variaient de 30 $ 45 $, aujourd'hui, jusqu'à 80 $.
Le nombre de parties à Melbourne a également augmenté. De 1998 à 2000, l'agent Mad a organisé un événement tous les deux mois. Au cours des deux dernières années, il a accueilli deux fois plus cher chaque mois. Future Entertainment, la plus grande entreprise de promotion de danse en Australie, a également augmenté ses événements.
Mais certains clubbers sont mécontents de l'élément commercial croissant. Le festival de musique de danse traditionnel importé Gatecrasher a perdu de l'argent l'année dernière, après seulement 6000 personnes sur deux jours au Old Scotch Oval. Il devait se reproduire le week-end dernier mais a été annulé cette année. Cependant, les organisateurs disent qu'il sera de retour l'année prochaine.
Le succès continu de Earthcore, qui a eu lieu l'année dernière le même week-end que Gatecrasher, montre que la danse est encore en plein essor. Pourtant, «les gens aiment Earthcore parce qu'il est encore souterrain et organique et il a une identité», affirme le publiciste DJ et Earthcore Barrie Barton.
Il est moins enthousiaste pour la scène en général. 'Dans les jours fervents de la danse, l'attrait majeur était qu'il s'agissait de souterrains. Aujourd'hui, vous entendez la même musique dans les boîtes de nuit que chez Nova FM. Une partie de quelque chose de différent est perdue'.
À l'œil non formé,montre rolex femme oyster perpetual contrefaçon, il pourrait ressembler à un croisement entre la danse de poulet et un robot piétinant. Mais pour les jeunes nightclubbers qui passent de nombreuses heures à maîtriser, le Melbourne Shuffle est une forme d'art et reconnu dans les cercles de danse internationaux comme Melbourne.
'Dans la piste de danse, Melburnians devient fou', dit Sarah Mitchell, 27 ans, de St Kilda. 'Ils ont ce style de danse appelé Melbourne shuffle et ils sortent.'
Alistair Weddell, 22 ans, est d'accord. Il a découvert le shuffle à Hard Kandy, un événement de danse du vendredi soir dans la ville, après qu'une blessure au mollet l'a amené ici en Nouvelle-Zélande pour une opération chirurgicale il y a deux ans. Weddell,replique rolex oyster perpetual or, qui vit maintenant à Melbourne, dit que le shuffle est «le style de danse le plus novateur qui existe depuis le breakdancing. Il est tellement plus pertinent pour les jeunes que toute autre danse que je connais»,rolex femme datejust faux, dit-il.
Les Européens ont tendance à danser des hanches, dit Smith, qui vit aujourd'hui à Londres. Dans les clubs techno et trance de Melbourne, où le shuffle est le plus commun, il s'agit des pieds.
Le shuffle est un mouvement rapide du talon et du pied, couplé à une action de bras correspondante. Alors que la danse est une forme libre (aucune autre personne ne se distingue exactement de la même manière), l'étape de base consiste à mélanger à plusieurs reprises vos pieds vers l'intérieur, puis vers l'extérieur, en poussant les bras vers le haut et vers le bas, ou côte à côte, dans le temps avec le rythme. Le haut du corps continue à 'bop' avec la musique.
Avec la pratique, les shufflers peuvent ajouter un spin de 360 degrés,contrefaçon oyster perpetual day date prix, une étape ou deux de côté chic, et même un saut à double pied pour faire correspondre les pics de la musique. La poudre de talc est parfois saupoudrée sur le sol, de sorte que les danseurs peuvent glisser et glisser plus rapidement lorsqu'ils mélangent. Il y a même une compétition, le Shuffle Off, qui se tient à Melbourne tous les quelques mois.
Le shuffle est une des raisons pour lesquelles, pour les milliers de personnes de Melbourne qui font la boite de nuit chaque semaine, cette ville possède une culture de danse unique. Plus de 100 clubs, mais pas tous dans le quartier central des affaires et les banlieues intérieures, s'adressent à la scène de la danse électronique.
D'autres événements tels que les raves ou les parties de danse en plein air peuvent être organisés n'importe où: dans les stades, sur les terrains vacants sous le pont de West Gate et dans les enclos du pays. Les épreuves de danse de pays sont connues sous le nom de 'dofus de buissons', car c'est ce à quoi ressemble le battement. Il y a dix ans, un bon élan ne dessinait pas plus de 400 personnes 'qui connaissaient réellement la techno', explique Richie McNeil, un DJ , Promoteur du parti de danse et, selon le mythe urbain, l'un des créateurs du shuffle.
Les évènements tels que Summadayze, célébrés le Jour de l'An et les Deux Tribus, organisés à l'Arena Rod Laver le week-end de la fête du Travail, peuvent attirer des foules allant jusqu'à 20 000.
La saison des fêtes d'été de Melbourne a débuté samedi dernier lorsque 7500 personnes sont allées à Earthcore dans un cratère volcanique près d'Ararat.
Il y a beaucoup d'argent dans la danse. Les DJs volent en provenance de Grande-Bretagne ou d'Europe pour les grandes fêtes et peuvent gagner jusqu'à 40 000 $ par nuit.
Andy Van, de Frankston, fait partie du duo de danse Madison Avenue, dont le single, Don 't Call Me Baby, a dépassé les charts britanniques il y a deux ans. Il dit que Melbourne se classe comme l'une des meilleures capitales de danse du monde.
'Vous allez à Ibiza, à Londres, en Europe, à Los Angeles et en Australie. Chaque DJ freaking dans le monde veut venir et travailler en Australie le Nouvel An.
Pete Tong, Roger Sanchez, Fatboy Slim, ils l'aiment tous ici. '
Entrepreneur Michael Gudinski, qui a fait son nom dans le rock australien, a reniflé le vent.
En 1998, il a vendu sa société, Mushroom Records, a relégué ses sorties rock et pop à son label de boutique, Liberation, et a créé une nouvelle société, l'agent Mad, pour présenter des DJ internationaux.
Pendant ce temps, la vieille étiquette de Gudinski maintenant appelée Festival Mushroom Records et appartenant à News Limited a également évolué vers la danse.
'Traditionnellement, nous avons été un label rock, et nous voulions nous diversifier un peu', a déclaré Michael Parisi, directeur général de Festival Mushroom. 'Il y avait un trou gigantesque pour la danse dans cette entreprise'.
Gudinski dit que «dans les boîtes de nuit et en travaillant avec les importations, je pouvais voir la musique de danse grandir et je l'ai très très bien pris très tôt'.
Personnellement, il n'est pas un converti complet, il préfère toujours le rock and roll.
'Je suis toujours en attente de l'acte qui capture vraiment le buzz et l'ambiance de la danse'.
Pourtant, le changement de Gudinski montre combien la scène de la danse a changé dans une dizaine d'années depuis qu'elle a pris de l'ampleur sur Melbourne. La foule est plus grande, plus diversifiée et plus jeune. Les événements sont souvent plus commerciaux et les prix des billets pour les deux clubs et Les grandes fêtes de danse ont grimpé en flèche. Il y a cinq ans, les billets de danse variaient de 30 $ 45 $, aujourd'hui, jusqu'à 80 $.
Le nombre de parties à Melbourne a également augmenté. De 1998 à 2000, l'agent Mad a organisé un événement tous les deux mois. Au cours des deux dernières années, il a accueilli deux fois plus cher chaque mois. Future Entertainment, la plus grande entreprise de promotion de danse en Australie, a également augmenté ses événements.
Mais certains clubbers sont mécontents de l'élément commercial croissant. Le festival de musique de danse traditionnel importé Gatecrasher a perdu de l'argent l'année dernière, après seulement 6000 personnes sur deux jours au Old Scotch Oval. Il devait se reproduire le week-end dernier mais a été annulé cette année. Cependant, les organisateurs disent qu'il sera de retour l'année prochaine.
Le succès continu de Earthcore, qui a eu lieu l'année dernière le même week-end que Gatecrasher, montre que la danse est encore en plein essor. Pourtant, «les gens aiment Earthcore parce qu'il est encore souterrain et organique et il a une identité», affirme le publiciste DJ et Earthcore Barrie Barton.
Il est moins enthousiaste pour la scène en général. 'Dans les jours fervents de la danse, l'attrait majeur était qu'il s'agissait de souterrains. Aujourd'hui, vous entendez la même musique dans les boîtes de nuit que chez Nova FM. Une partie de quelque chose de différent est perdue'.
Voiture coincé en fourgonnette par paire de Kakakhstan pour prendre un nouveau véhicule 2
La plupart des vidéos de vidéos regardées EXCLUSIF: l'avion d'Ariana Grande revient aux États-Unis Moment de la tempête de la police armée du suicide de Manchester Le sang a vu goutter de la jambe de la victime après Manchester Moment,replique montre rolex femme oyster perpetual, la bombe explose au concert Ariana Grande Les filles crient et grimpent sur les barrières lors de l'évacuation Manchester Arena Scènes terrifiantes À l'intérieur de Manchester Arena alors que le groupe de foule se déplace L'homme des sans-abris décrit comment il a aidé après l'attaque de Manchester Sickening vidéo avertit de plus d'attaques après que les fans de Manchester Ariana Grande fussent loin du lieu après une explosion Police sur le suspect dans le cadre de l'enquête de Manchester N'invite pas de panique Les officiers judiciaires raid du suicide de Manchester
EXCLUSIF: premières photos d'Ariana Grande depuis Manchester. Écolière, 14 ans,faux rolex datejust or, qui a regardé Ariana Grande sur les béquilles. Aide pour les héros des sans-abri: propriétaire du Millionaire West Ham. Theresa May avertit qu'une nouvelle attaque terroriste est à craindre. PIERS MORGAN: Le meurtrier de Manchester peut avoir été un. Mon fils est innocent,rolex datejust homme faux, insiste le père de Manchester Arena. 'Comme des morceaux de feu': Mère et fille partagent des photos de. EXCLUSIF: la mère de l'héraut d'Ariana Grande qui a aidé à apporter. La Grande-Bretagne est en lock-out: l'armée déploie 1000 personnes fortement armées. 'Notre petite princesse a eu tant de chance': la joie du père. Mère d'un adolescent de 18 ans, tuée dans une attaque terroriste de Manchester. Les touristes regardent avec horreur l'arrestation d'un homme armé. Horreur sur le M6: Le conducteur du camion est arrêté après quatre. Plus de 24 heures,rolex oyster or contrefaçon, les familles désespérées cherchent toujours. L'enfer d'Aaron Hernandez derrière les barreaux: la star de la NFL a été tuée. Elle n'a toujours pas la main: Melania s'en va. Le frère du terroriste a été arrêté: moment dramatique armé. Bombardier d'un brique rouge qui «connaissait un ISIS. Les nouvelles les plus récentes.
La plupart des vidéos de vidéos regardées EXCLUSIF: l'avion d'Ariana Grande revient aux États-Unis Moment de la tempête de la police armée du suicide de Manchester Le sang a vu goutter de la jambe de la victime après Manchester Moment,replique montre rolex femme oyster perpetual, la bombe explose au concert Ariana Grande Les filles crient et grimpent sur les barrières lors de l'évacuation Manchester Arena Scènes terrifiantes À l'intérieur de Manchester Arena alors que le groupe de foule se déplace L'homme des sans-abris décrit comment il a aidé après l'attaque de Manchester Sickening vidéo avertit de plus d'attaques après que les fans de Manchester Ariana Grande fussent loin du lieu après une explosion Police sur le suspect dans le cadre de l'enquête de Manchester N'invite pas de panique Les officiers judiciaires raid du suicide de Manchester
EXCLUSIF: premières photos d'Ariana Grande depuis Manchester. Écolière, 14 ans,faux rolex datejust or, qui a regardé Ariana Grande sur les béquilles. Aide pour les héros des sans-abri: propriétaire du Millionaire West Ham. Theresa May avertit qu'une nouvelle attaque terroriste est à craindre. PIERS MORGAN: Le meurtrier de Manchester peut avoir été un. Mon fils est innocent,rolex datejust homme faux, insiste le père de Manchester Arena. 'Comme des morceaux de feu': Mère et fille partagent des photos de. EXCLUSIF: la mère de l'héraut d'Ariana Grande qui a aidé à apporter. La Grande-Bretagne est en lock-out: l'armée déploie 1000 personnes fortement armées. 'Notre petite princesse a eu tant de chance': la joie du père. Mère d'un adolescent de 18 ans, tuée dans une attaque terroriste de Manchester. Les touristes regardent avec horreur l'arrestation d'un homme armé. Horreur sur le M6: Le conducteur du camion est arrêté après quatre. Plus de 24 heures,rolex oyster or contrefaçon, les familles désespérées cherchent toujours. L'enfer d'Aaron Hernandez derrière les barreaux: la star de la NFL a été tuée. Elle n'a toujours pas la main: Melania s'en va. Le frère du terroriste a été arrêté: moment dramatique armé. Bombardier d'un brique rouge qui «connaissait un ISIS. Les nouvelles les plus récentes.
Puis-je Uber ou Lyft après avoir atterri
Puis-je Uber ou Lyft après avoir atterri? C'est compliqué. Voici votre triche d'aéroport
Irfan Khan / Los Angeles Times
Une voiture avec des autocollants Uber et Lyft sur son pare-brise quitte le niveau de départ à LAX. Bientôt,montre oyster perpetual rolex faux, les opérations de partage devraient être capables de ramasser et de déposer à l'aéroport.
Une voiture avec des autocollants Uber et Lyft sur son pare-brise quitte le niveau de départ à LAX. Bientôt, les opérations de partage devraient être capables de ramasser et de déposer à l'aéroport.
(Irfan Khan / Los Angeles Times)
Par Brian SumersSi tout se passe comme prévu, les voyageurs pourraient bientôt convoyer des fournisseurs de voyages tels que UberX et Lyft pour les ramener à la maison après leur déploiement à l'aéroport international de Los Angeles.
Pour les passagers, cette excellente nouvelle, parlant financièrement. Un taxi de LAX vers le centre-ville peut coûter 50 $ ou plus sans conseil.
Les leaders du marché de Ride Uber et Lyft se rapprochent de 30 $ pour le même voyage, sauf pendant les périodes de forte demande lorsqu'ils coûtent plus cher, parfois beaucoup plus, un phénomène que Uber appelle les prix. Le partage de trajet, devenir un problème dans la campagne présidentielle avec d'autres problèmes d'économie de partage, n'est-ce pas une excellente nouvelle pour les chauffeurs de taxi et les compagnies de taxi, qui ont maintenant un monopole quasi immédiat à LAX.
La modification pourrait avoir lieu dès septembre,faux rolex datejust.
Pour l'instant, les conducteurs peuvent déposer des passagers partout à LAX, mais ils peuvent retirer des passagers.
Selon les règles actuelles de LAX, seuls les chauffeurs professionnels de taxis et de librairie peuvent collecter des passagers pour de l'argent.
Uber a un segment d'affaires qui distribue les conducteurs professionnels, mais ce service coûte plus cher que UberX. Et quelques-uns à l'étranger. Au-dessous du tableau,rolex oyster or contrefaçon, les détails de chacun de ces aéroports expliquent pourquoi les règles et les règlements sont tels qu'ils sont. ET AÉROPORTS INTERNATIONAUX Les autorisations d'aéroport sont autorisées? Des camions sont autorisés? Los Angeles International Oui En attente Burbank Bob Hope Oui Oui, mais pas au terminal principal John Wayne / Orange County Oui Oui Long Beach Oui Non Ontario Oui Non, sauf si le conducteur a un permis San Diego Oui Oui Atlanta Oui Non Austin Oui Oui Baltimore Washington Non Non Chicago O 'Hare Oui Non Denver Oui Oui Houston George Bush Oui Oui Las Vegas Non, pour l'instant Non, pour l'instant Miami Non Non New York's JFK
Et LaGuardia Oui Oui Oakland Oui Oui Phoenix Oui Oui Portland Oui Oui San Francisco Oui Oui Seattle Tacoma Oui Non Washington Dulles
Et Reagan National Oui Oui Auckland, Nouvelle-Zélande Oui Oui Londres Heathrow Oui Oui Melbourne, Australie Oui Oui Sydney, Australie Non NonBurbank Le service de Bob Hope A propos du trajet peut vous déposer à l'aéroport Burbank Bob Hope, mais il ne peut pas vous chercher au Terminal. (Catharine Hamm / Los Angeles Times)
Détails: Les conducteurs de Ride Share peuvent déposer des passagers à Burbank, mais ils ne peuvent pas faire de camionneurs sur la chaussée du terminal principal.
Les conducteurs de Ride part peuvent attendre dans les parkings de l'aéroport pour les passagers arrivant. L'aéroport facture 3 $ pour 30 minutes de stationnement, qui est généralement transmis aux coureurs.
John Wayne / Orange CountyDetails: Après avoir permis d'autoriser uniquement les décollages, l'aéroport du comté d'Orange plus tôt cette année a commencé à autoriser les automobilistes à ramasser les passagers.
Jusqu'à présent, Lyft, Uber et Wingz ont acquis des permis.
Chaque mois, les entreprises doivent fournir à l'aéroport des journaux d'activités pour les conducteurs et payer l'aéroport 2,25 $ pour chaque ramassage, tout comme d'autres pilotes commerciaux paient.
Long BeachDetails: Toute personne peut déposer des passagers à l'aéroport de Long Beach, mais conduire des conducteurs ne peut pas ramasser des passagers au terminal.
Le Conseil de la ville de Long Beach devrait apporter un changement de politique pour permettre à Lyft, UberX et d'autres conducteurs de voyage pour recueillir des voyageurs. Beach explore cette question en tant que ville, a déclaré la porte-parole de l'aéroport Stephanie Montuya Morisky.
Tous les conducteurs peuvent déposer des passagers en Ontario, mais seuls les conducteurs ayant un permis peuvent retirer des voyageurs, ce qui rend impossible aux voyageurs de faire appel à une Lyft ou UberX depuis les terminaux. S'attendent à entreprendre une initiative qui abordera l'ONT dans un proche avenir,rolex lady datejust faux, a déclaré Romo.
Puis-je Uber ou Lyft après avoir atterri? C'est compliqué. Voici votre triche d'aéroport
Irfan Khan / Los Angeles Times
Une voiture avec des autocollants Uber et Lyft sur son pare-brise quitte le niveau de départ à LAX. Bientôt,montre oyster perpetual rolex faux, les opérations de partage devraient être capables de ramasser et de déposer à l'aéroport.
Une voiture avec des autocollants Uber et Lyft sur son pare-brise quitte le niveau de départ à LAX. Bientôt, les opérations de partage devraient être capables de ramasser et de déposer à l'aéroport.
(Irfan Khan / Los Angeles Times)
Par Brian SumersSi tout se passe comme prévu, les voyageurs pourraient bientôt convoyer des fournisseurs de voyages tels que UberX et Lyft pour les ramener à la maison après leur déploiement à l'aéroport international de Los Angeles.
Pour les passagers, cette excellente nouvelle, parlant financièrement. Un taxi de LAX vers le centre-ville peut coûter 50 $ ou plus sans conseil.
Les leaders du marché de Ride Uber et Lyft se rapprochent de 30 $ pour le même voyage, sauf pendant les périodes de forte demande lorsqu'ils coûtent plus cher, parfois beaucoup plus, un phénomène que Uber appelle les prix. Le partage de trajet, devenir un problème dans la campagne présidentielle avec d'autres problèmes d'économie de partage, n'est-ce pas une excellente nouvelle pour les chauffeurs de taxi et les compagnies de taxi, qui ont maintenant un monopole quasi immédiat à LAX.
La modification pourrait avoir lieu dès septembre,faux rolex datejust.
Pour l'instant, les conducteurs peuvent déposer des passagers partout à LAX, mais ils peuvent retirer des passagers.
Selon les règles actuelles de LAX, seuls les chauffeurs professionnels de taxis et de librairie peuvent collecter des passagers pour de l'argent.
Uber a un segment d'affaires qui distribue les conducteurs professionnels, mais ce service coûte plus cher que UberX. Et quelques-uns à l'étranger. Au-dessous du tableau,rolex oyster or contrefaçon, les détails de chacun de ces aéroports expliquent pourquoi les règles et les règlements sont tels qu'ils sont. ET AÉROPORTS INTERNATIONAUX Les autorisations d'aéroport sont autorisées? Des camions sont autorisés? Los Angeles International Oui En attente Burbank Bob Hope Oui Oui, mais pas au terminal principal John Wayne / Orange County Oui Oui Long Beach Oui Non Ontario Oui Non, sauf si le conducteur a un permis San Diego Oui Oui Atlanta Oui Non Austin Oui Oui Baltimore Washington Non Non Chicago O 'Hare Oui Non Denver Oui Oui Houston George Bush Oui Oui Las Vegas Non, pour l'instant Non, pour l'instant Miami Non Non New York's JFK
Et LaGuardia Oui Oui Oakland Oui Oui Phoenix Oui Oui Portland Oui Oui San Francisco Oui Oui Seattle Tacoma Oui Non Washington Dulles
Et Reagan National Oui Oui Auckland, Nouvelle-Zélande Oui Oui Londres Heathrow Oui Oui Melbourne, Australie Oui Oui Sydney, Australie Non NonBurbank Le service de Bob Hope A propos du trajet peut vous déposer à l'aéroport Burbank Bob Hope, mais il ne peut pas vous chercher au Terminal. (Catharine Hamm / Los Angeles Times)
Détails: Les conducteurs de Ride Share peuvent déposer des passagers à Burbank, mais ils ne peuvent pas faire de camionneurs sur la chaussée du terminal principal.
Les conducteurs de Ride part peuvent attendre dans les parkings de l'aéroport pour les passagers arrivant. L'aéroport facture 3 $ pour 30 minutes de stationnement, qui est généralement transmis aux coureurs.
John Wayne / Orange CountyDetails: Après avoir permis d'autoriser uniquement les décollages, l'aéroport du comté d'Orange plus tôt cette année a commencé à autoriser les automobilistes à ramasser les passagers.
Jusqu'à présent, Lyft, Uber et Wingz ont acquis des permis.
Chaque mois, les entreprises doivent fournir à l'aéroport des journaux d'activités pour les conducteurs et payer l'aéroport 2,25 $ pour chaque ramassage, tout comme d'autres pilotes commerciaux paient.
Long BeachDetails: Toute personne peut déposer des passagers à l'aéroport de Long Beach, mais conduire des conducteurs ne peut pas ramasser des passagers au terminal.
Le Conseil de la ville de Long Beach devrait apporter un changement de politique pour permettre à Lyft, UberX et d'autres conducteurs de voyage pour recueillir des voyageurs. Beach explore cette question en tant que ville, a déclaré la porte-parole de l'aéroport Stephanie Montuya Morisky.
Tous les conducteurs peuvent déposer des passagers en Ontario, mais seuls les conducteurs ayant un permis peuvent retirer des voyageurs, ce qui rend impossible aux voyageurs de faire appel à une Lyft ou UberX depuis les terminaux. S'attendent à entreprendre une initiative qui abordera l'ONT dans un proche avenir,rolex lady datejust faux, a déclaré Romo.
Calendrier communautaire
Au 89, avenue Monticello, à Jersey City. Un billet de film AMC gratuit sera remis à chaque donneur de sang. Tous les donateurs doivent avoir une carte d'identité présent. Tous les donateurs doivent peser au moins 120 livres. Au 139, avenue Cator, Jersey City. Au même endroit. Des frais d'inscription de 20 $ et une copie du certificat de naissance sont nécessaires pour les essais. Dimanche à DeKorte Park, Lyndhurst. La date de pluie est le 4 août. Pour obtenir de l'information, appelez le (201) 777 2431. à Fussy Friends au 148, avenue Newark, Jersey City. Pour information,rolex daytona or et acier replique, appelez le (201) 895 3874. chez Petsmart au 400 Mill Creek Mall à Secaucus. Pour information, appelez le (201) 598 0952. chez PetValu au 3017 Crossing Way, Bayonne. Pour information,replique rolex daytona blanche, appelez le (201) 895 0952. mardi au Meadowlands Entertainment Centre, 2 DeKorte Park Plaza, Lyndhurst. Pour information, appelez le (201) 777 2431. le jeudi 1er août au parc de la rivière Barge du NJMC à Carlstadt. Pour information, appelez le (201) 777 2431. aux dates suivantes aux endroits suivants: les jeudis, le 1er août et le 15 août à 1005, rue Washington, Hoboken. Pour information appelez (201) 796 7788.
GIRL SCOUTS FAMILY MUSIC FESTIVAL
Le Girl Scouts Heart of New Jersey accueillera son premier festival de musique familiale samedi, août au Camp Dewitt au 605 Montgomery Road, Hillsborough. L'épreuve est ouverte à des scouts féminines enregistrées et futures et mettra en vedette des activités, des cadeaux et des divertissements en plein air. L'entrée est de 8 $. Pour information, appelez le (908) 947 1708.
Les organisateurs de The Not Yo Mama Fair tiendront des événements variés tout au long du printemps, de l'été et de l'automne 2013. Les événements auront lieu au Van Vorst Park, dans le centre-ville, à Jersey City. Voici les dates de tous les événements le samedi 3 août, le 7 sept. Oct., Zion Church organise un programme d'enrichissement pédagogique enseigné par des enseignants certifiés K 12. Les mathématiques, les arts du langage, la lecture, la HSPA, l'écriture universitaire et le tutorat SAT Prep seront disponibles. À midi du lundi au vendredi. Le petit-déjeuner et le déjeuner seront servis. Le programme se déroulera jusqu'au vendredi 16 août. Il n'est pas trop tard pour se joindre. Pour information, appelez le (201) 332 4447. à Dine In Deed 2012, qui profite au Boys Boys Club du comté d'Hudson et à l'Association for Science in Autism Treatment.
BEOF HEADSTART ACCEPTE LES VOUCHERS DE LIGUE URBAINE
Le programme Head Start de Bayonne Economic Opportunity Foundation acceptera les bons de la Ligue urbaine pour l'année scolaire de septembre 2013. Pour être admissible, les enfants doivent avoir entre 3 et 5 ans d'ici le 1er octobre 2013.
ENTREPOSAGE POUR L'ENSEMBLE DES FOURNITURES D'ÉTUDIANTS
Les clubs Boys and Girls du comté d'Hudson tiendront un Stapes pour les étudiants qui cherchent des dons de matériel scolaire pour les jeunes défavorisés. Les dons peuvent être déposés dans les magasins suivants: 110 Lefante Way, South Cove Commons,replique rolex daytona neuf, Bayonne; 461 469 West Street, Fort Lee; Route 440, Jersey City; 613 Washington Blvd.,daytona rolex acier replique, Jersey City.
Le département de police de Hoboken accueillera sa soirée nationale annuelle le mardi 6 août au 4e St. Park, Hoboken. L'événement augmentera la sensibilisation au crime et à la drogue dans la communauté et comportera un concours de repas de parade et de pastèque. Pour information appelez (201) 420 2100.
Au 89, avenue Monticello, à Jersey City. Un billet de film AMC gratuit sera remis à chaque donneur de sang. Tous les donateurs doivent avoir une carte d'identité présent. Tous les donateurs doivent peser au moins 120 livres. Au 139, avenue Cator, Jersey City. Au même endroit. Des frais d'inscription de 20 $ et une copie du certificat de naissance sont nécessaires pour les essais. Dimanche à DeKorte Park, Lyndhurst. La date de pluie est le 4 août. Pour obtenir de l'information, appelez le (201) 777 2431. à Fussy Friends au 148, avenue Newark, Jersey City. Pour information,rolex daytona or et acier replique, appelez le (201) 895 3874. chez Petsmart au 400 Mill Creek Mall à Secaucus. Pour information, appelez le (201) 598 0952. chez PetValu au 3017 Crossing Way, Bayonne. Pour information,replique rolex daytona blanche, appelez le (201) 895 0952. mardi au Meadowlands Entertainment Centre, 2 DeKorte Park Plaza, Lyndhurst. Pour information, appelez le (201) 777 2431. le jeudi 1er août au parc de la rivière Barge du NJMC à Carlstadt. Pour information, appelez le (201) 777 2431. aux dates suivantes aux endroits suivants: les jeudis, le 1er août et le 15 août à 1005, rue Washington, Hoboken. Pour information appelez (201) 796 7788.
GIRL SCOUTS FAMILY MUSIC FESTIVAL
Le Girl Scouts Heart of New Jersey accueillera son premier festival de musique familiale samedi, août au Camp Dewitt au 605 Montgomery Road, Hillsborough. L'épreuve est ouverte à des scouts féminines enregistrées et futures et mettra en vedette des activités, des cadeaux et des divertissements en plein air. L'entrée est de 8 $. Pour information, appelez le (908) 947 1708.
Les organisateurs de The Not Yo Mama Fair tiendront des événements variés tout au long du printemps, de l'été et de l'automne 2013. Les événements auront lieu au Van Vorst Park, dans le centre-ville, à Jersey City. Voici les dates de tous les événements le samedi 3 août, le 7 sept. Oct., Zion Church organise un programme d'enrichissement pédagogique enseigné par des enseignants certifiés K 12. Les mathématiques, les arts du langage, la lecture, la HSPA, l'écriture universitaire et le tutorat SAT Prep seront disponibles. À midi du lundi au vendredi. Le petit-déjeuner et le déjeuner seront servis. Le programme se déroulera jusqu'au vendredi 16 août. Il n'est pas trop tard pour se joindre. Pour information, appelez le (201) 332 4447. à Dine In Deed 2012, qui profite au Boys Boys Club du comté d'Hudson et à l'Association for Science in Autism Treatment.
BEOF HEADSTART ACCEPTE LES VOUCHERS DE LIGUE URBAINE
Le programme Head Start de Bayonne Economic Opportunity Foundation acceptera les bons de la Ligue urbaine pour l'année scolaire de septembre 2013. Pour être admissible, les enfants doivent avoir entre 3 et 5 ans d'ici le 1er octobre 2013.
ENTREPOSAGE POUR L'ENSEMBLE DES FOURNITURES D'ÉTUDIANTS
Les clubs Boys and Girls du comté d'Hudson tiendront un Stapes pour les étudiants qui cherchent des dons de matériel scolaire pour les jeunes défavorisés. Les dons peuvent être déposés dans les magasins suivants: 110 Lefante Way, South Cove Commons,replique rolex daytona neuf, Bayonne; 461 469 West Street, Fort Lee; Route 440, Jersey City; 613 Washington Blvd.,daytona rolex acier replique, Jersey City.
Le département de police de Hoboken accueillera sa soirée nationale annuelle le mardi 6 août au 4e St. Park, Hoboken. L'événement augmentera la sensibilisation au crime et à la drogue dans la communauté et comportera un concours de repas de parade et de pastèque. Pour information appelez (201) 420 2100.
Être Leidy Figureroa parle à CBS News '
La jeune mariée, Leidy Figueroa, a 24 ans et vient de Lima. Sa robe ne vient pas de Kleinfeld, et Randy Fenoli du réseau TLC 'Say Yes to the Dress' n'aide pas la mariée à choisir sa robe. Mais le mariage est sûr de faire des nouvelles, néanmoins.
Joran van der Sloot devrait dire 'Je fais' le 22 mai vers midi, selon Figueroa, qui a parlé à CBS News 'Crimesider. La cérémonie civile aura lieu à l'intérieur de la prison de Piedras Gordas, où Van der Sloot desservira un Décès de 28 ans pour meurtre. Figueroa dit à Crimesider que les témoins seront l'avocat péruvien de van der Sloot, Maximo Altez, et la marraine de Figueroa.
La mariée à raconter à Crimesider qu'elle a rencontré van der Sloot en juillet 2010 quand elle est allée avec un cousin pour visiter un autre détenu. Ce détenu a agi en tant que partenaire de Figueroa et van der Sloot, et depuis lors, Figueroa a visité la prison deux fois par semaine. Elle dit qu'elle apporte toujours des plats faits maison à son mari.
En 2012,montre homme rolex daytona replique, Joran van der Sloot a été reconnu coupable d'avoir tué Stephany Flores dans un hôtel de Lima après que les deux se soient rencontrés plus tôt dans une table de poker de casino. Le meurtre de Flores s'est passé cinq ans à la date à laquelle l'adolescent d'Alabama Natalee Holloway a disparu à Aruba. Elle a été vue pour la dernière fois en mai 2005 avec van der Sloot. Holloway n'a jamais été trouvé et van der Sloot n'a jamais été accusé en lien avec sa disparition.
Figueroa a récemment acheté une maison près de la prison et a déclaré qu'elle était enceinte de cinq mois avec l'enfant de van der Sloot; le bébé est arrivé en septembre. Selon l'avocat de van der Sloot,replique rolex daytona acier neuve, le Néerlandais étudie la gestion des affaires internationales par correspondance Cours d'une université péruvienne.
Figueroa dit à Crimesider que Joran van der Sloot s'est transformé 'en une nouvelle personne',cosmograph daytona replique. Elle dit aussi que van der Sloot apprécie ses cours d'art et d'artisanat de la prison.
Van der Sloot avait son avocat l'anneau de mariage l'année dernière, selon Figueroa. L'anneau a une petite pierre, pas un diamant. La mariée est toujours à la recherche d'une robe de mariée. Elle travaille également à obtenir un permis pour enregistrer et photographier la cérémonie.
Il n'y aura pas de réception à la prison. Mais le Pérou rapporte que van der Sloot a deux amis proches à Peidras Gordas. Ils sont 'Crazy David' Sanchez et 'El Cholo' Payet, deux hooligans de football qui servent chacun 35 ans pour un homicide lors d'un match de football en 2011.
Un journal hollandais a rapporté en février que van der Sloot a récemment affirmé qu'il avait vu une lumière blanche et lumineuse dans sa cellule et que c'était l'image du média néerlandais Robbert van den Broeke. Donc,rolex daytona or rose occasion replique, si le mariage van der Sloot Figueroa devait se transformer en curieux Paranormal, peut-être que personne ne devrait être surpris.
Joran van der Sloot a purgé quatre ans de sa peine de 28 ans pour le meurtre de Stephany Flores. Lorsqu'il est libéré de prison au Pérou, il sera extradé vers les États-Unis où il se heurte à des accusations d'extorsion fédérales en Alabama dans le cadre de l'affaire Natalee Holloway.
La jeune mariée, Leidy Figueroa, a 24 ans et vient de Lima. Sa robe ne vient pas de Kleinfeld, et Randy Fenoli du réseau TLC 'Say Yes to the Dress' n'aide pas la mariée à choisir sa robe. Mais le mariage est sûr de faire des nouvelles, néanmoins.
Joran van der Sloot devrait dire 'Je fais' le 22 mai vers midi, selon Figueroa, qui a parlé à CBS News 'Crimesider. La cérémonie civile aura lieu à l'intérieur de la prison de Piedras Gordas, où Van der Sloot desservira un Décès de 28 ans pour meurtre. Figueroa dit à Crimesider que les témoins seront l'avocat péruvien de van der Sloot, Maximo Altez, et la marraine de Figueroa.
La mariée à raconter à Crimesider qu'elle a rencontré van der Sloot en juillet 2010 quand elle est allée avec un cousin pour visiter un autre détenu. Ce détenu a agi en tant que partenaire de Figueroa et van der Sloot, et depuis lors, Figueroa a visité la prison deux fois par semaine. Elle dit qu'elle apporte toujours des plats faits maison à son mari.
En 2012,montre homme rolex daytona replique, Joran van der Sloot a été reconnu coupable d'avoir tué Stephany Flores dans un hôtel de Lima après que les deux se soient rencontrés plus tôt dans une table de poker de casino. Le meurtre de Flores s'est passé cinq ans à la date à laquelle l'adolescent d'Alabama Natalee Holloway a disparu à Aruba. Elle a été vue pour la dernière fois en mai 2005 avec van der Sloot. Holloway n'a jamais été trouvé et van der Sloot n'a jamais été accusé en lien avec sa disparition.
Figueroa a récemment acheté une maison près de la prison et a déclaré qu'elle était enceinte de cinq mois avec l'enfant de van der Sloot; le bébé est arrivé en septembre. Selon l'avocat de van der Sloot,replique rolex daytona acier neuve, le Néerlandais étudie la gestion des affaires internationales par correspondance Cours d'une université péruvienne.
Figueroa dit à Crimesider que Joran van der Sloot s'est transformé 'en une nouvelle personne',cosmograph daytona replique. Elle dit aussi que van der Sloot apprécie ses cours d'art et d'artisanat de la prison.
Van der Sloot avait son avocat l'anneau de mariage l'année dernière, selon Figueroa. L'anneau a une petite pierre, pas un diamant. La mariée est toujours à la recherche d'une robe de mariée. Elle travaille également à obtenir un permis pour enregistrer et photographier la cérémonie.
Il n'y aura pas de réception à la prison. Mais le Pérou rapporte que van der Sloot a deux amis proches à Peidras Gordas. Ils sont 'Crazy David' Sanchez et 'El Cholo' Payet, deux hooligans de football qui servent chacun 35 ans pour un homicide lors d'un match de football en 2011.
Un journal hollandais a rapporté en février que van der Sloot a récemment affirmé qu'il avait vu une lumière blanche et lumineuse dans sa cellule et que c'était l'image du média néerlandais Robbert van den Broeke. Donc,rolex daytona or rose occasion replique, si le mariage van der Sloot Figueroa devait se transformer en curieux Paranormal, peut-être que personne ne devrait être surpris.
Joran van der Sloot a purgé quatre ans de sa peine de 28 ans pour le meurtre de Stephany Flores. Lorsqu'il est libéré de prison au Pérou, il sera extradé vers les États-Unis où il se heurte à des accusations d'extorsion fédérales en Alabama dans le cadre de l'affaire Natalee Holloway.
Le chercheur en cancer Ralph Meyer a été nommé à la tête de l'hôpital Juravinski
Le Dr Ralph Meyer retourne à Hamilton en tant que président de l'hôpital ainsi que le vice-président régional de Cancer Care Ontario pour le Programme régional de lutte contre le cancer Hamilton Niagara Haldimand Brant.
Il commencera le 19 août,replique rolex daytona or, en prenant le relais du Dr Bill Evans qui descend le 30 juin.
«Les besoins en cancérologie dans cette région sont complexes et uniques», a déclaré Michael Sherar, PDG et président de CCO. «En ce qui concerne l'avenir, nous sommes convaincus qu'avec le leadership du Dr Meyer,replique rolex daytona cuir, les antécédents de succès et d'engagement envers les soins et l'innovation de qualité, les patients soignés continueront à recevoir des soins cancéreux exceptionnels».
Meyer est un hématologue,contrefaçon rolex daytona platine, ce qui signifie qu'il se spécialise dans les troubles sanguins. Il est reconnu à l'échelle nationale comme un expert dans les essais cliniques sur le cancer avec son travail visant à tester de nouveaux traitements pour les patients atteints de cancers du sang et des systèmes lymphatiques, y compris le lymphome de Hodgkin et non Hodgkin, le myélome multiple et la leucémie. Il a été reconnu pour l'évaluation de la thérapie contre le cancer conçue pour réduire les effets secondaires à long terme du traitement des patients atteints de lymphome de Hodgkin.
'Nous croyons fermement que son engagement à augmenter continuellement le bar dans les soins contre le cancer en fait la personne idéale pour diriger l'hôpital Juravinski et le Centre du cancer et le programme régional de lutte contre le cancer dans les années à venir', a déclaré Murray Martin, PDG et président de Hamilton Health Sciences , Qui dirige l'hôpital et le centre.
Meyer est actuellement directeur du NCIC Clinical Trials Group, qui supervise la recherche sur le traitement du cancer, les soins de soutien et la prévention au niveau national et international. Il est titulaire d'une chaire de recherche clinique sur le cancer, est professeur dans les départements de l'oncologie,replique rolex daytona or rose, de la médecine et de la santé communautaire et de l'épidémiologie chez Queen's et un hématologue à l'Hôpital général de Kingston.
Il est diplômé de l'école de médecine de McMaster en 1978 et a complété sa formation en résidence à Hamilton en médecine interne en 1982 et en hématologie en 1984. Il a débuté sa carrière à Hamilton et a été chef d'hématologie à Juravinski de 2000 à 2006.
Le Dr Ralph Meyer retourne à Hamilton en tant que président de l'hôpital ainsi que le vice-président régional de Cancer Care Ontario pour le Programme régional de lutte contre le cancer Hamilton Niagara Haldimand Brant.
Il commencera le 19 août,replique rolex daytona or, en prenant le relais du Dr Bill Evans qui descend le 30 juin.
«Les besoins en cancérologie dans cette région sont complexes et uniques», a déclaré Michael Sherar, PDG et président de CCO. «En ce qui concerne l'avenir, nous sommes convaincus qu'avec le leadership du Dr Meyer,replique rolex daytona cuir, les antécédents de succès et d'engagement envers les soins et l'innovation de qualité, les patients soignés continueront à recevoir des soins cancéreux exceptionnels».
Meyer est un hématologue,contrefaçon rolex daytona platine, ce qui signifie qu'il se spécialise dans les troubles sanguins. Il est reconnu à l'échelle nationale comme un expert dans les essais cliniques sur le cancer avec son travail visant à tester de nouveaux traitements pour les patients atteints de cancers du sang et des systèmes lymphatiques, y compris le lymphome de Hodgkin et non Hodgkin, le myélome multiple et la leucémie. Il a été reconnu pour l'évaluation de la thérapie contre le cancer conçue pour réduire les effets secondaires à long terme du traitement des patients atteints de lymphome de Hodgkin.
'Nous croyons fermement que son engagement à augmenter continuellement le bar dans les soins contre le cancer en fait la personne idéale pour diriger l'hôpital Juravinski et le Centre du cancer et le programme régional de lutte contre le cancer dans les années à venir', a déclaré Murray Martin, PDG et président de Hamilton Health Sciences , Qui dirige l'hôpital et le centre.
Meyer est actuellement directeur du NCIC Clinical Trials Group, qui supervise la recherche sur le traitement du cancer, les soins de soutien et la prévention au niveau national et international. Il est titulaire d'une chaire de recherche clinique sur le cancer, est professeur dans les départements de l'oncologie,replique rolex daytona or rose, de la médecine et de la santé communautaire et de l'épidémiologie chez Queen's et un hématologue à l'Hôpital général de Kingston.
Il est diplômé de l'école de médecine de McMaster en 1978 et a complété sa formation en résidence à Hamilton en médecine interne en 1982 et en hématologie en 1984. Il a débuté sa carrière à Hamilton et a été chef d'hématologie à Juravinski de 2000 à 2006.