Lactobacillus plantarum

Lactobacillus plantarum est une bactérie Gram positive, qui fait fermenter les plantes et est utilisée industriellement pour fabriquer du yogourt, du fromage et des légumes décapés. Outre les plantes, L. plantarum se trouve dans le tractus gastro-intestinal humain et agit comme une bactérie probiotique. Sa capacité à survivre dans le tractus GI a fait de cette bactérie une cible pour de nouvelles recherches pour l'utiliser comme véhicule pour délivrer des vaccins recombinants et des traitements contre les maladies. [1] En 2003, Michiel Kleerebezem a tracé le génome complet de Lactobacillus plantarum WCFS1. La souche WCFS1 de Lactobacillus plantarum est connue pour avoir 3 308 274 paires de bases et contient 3 052 gènes codant pour la protéine ainsi que trois plasmides (1 917 pb, 2,365 pb et 36 069 pb), ce qui explique sa grande adaptabilité. La teneur en G + C du chromosome est de 44,5%, mais les plasmides contiennent un peu moins de C + C. [1] Structure cellulaire et métabolismeLactobacillus plantarum est une bactérie hautement adaptable qui peut survivre à des températures comprises entre 1 et 60 degrés Celsius et aussi une très bonne pression atmosphérique. Le nom 'plantarum' indique que cette bactérie est une 'espèce des plantes'. L. plantarum se trouve en particulier dans les plantes fermentées, telles que kimchee. Cependant, il se retrouve également dans d'autres aliments fermentés tels que le yogourt et le fromage et il se trouve également dans les tractus animaux GI, la salive humaine et le vagin. [3] [4] [1] Lactobacillus plantarum 299v est réellement considéré comme un probiotique. En raison de sa capacité à survivre dans le tractus GI humain pendant> 6 jours, L. plantarum 299v peut inhiber la croissance d'autres bactéries nocives telles que E. coli dans l'hôte après consommation de viande contaminée. L. plantarum 299v se trouve dans divers aliments fermentés tels que le yogourt,contrefaçon rolex submariner pas cher, le fromage, le kimchee, et il est recommandé de consommer régulièrement pour soutenir le système immunitaire. En outre, la capacité de L. plantarum 299v à produire de l'acide lactique aide à maintenir des niveaux de pH sains et faibles du tractus GI. [1] [3] [4] En 2004, Jean Marie Perrier Cornet a découvert un moyen de contrôler la fermentation alimentaire en utilisant Lactobacillus plantarum, une bactérie alimentaire commune avec une résistance à une bonne gamme de température, de pression et de pH. Une méthode de pasteurisation froide sans congélation de la nourriture et donc la modification de la composition de l'aliment est une nouvelle technologie d'intérêt pour l'industrie alimentaire. Perrier Cornet a trouvé une optimisation de la procédure lors de la pasteurisation de L. plantarum pendant 10 min à des températures comprises entre 20 et 25 ° C et une pression entre 100 et 350 MPa. [5] En 2006, Michael Schultz a étudié les effets du traitement avec Lactobacillus plantarum 299v sur des souris immunodéficientes sujettes au développement de la colite. L'étude a révélé que L. plantarum 299v administré par voie orale avec de l'eau à des souris déficientes en interleukine 10 a produit des résultats significatifs de réduction de la colite immunitaire médiée. Cela suggère que L. plantarum 299v a le potentiel d'être utilisé contre la maladie inflammatoire intestinale clinique. [6] En 2008, Beatriz del Rio a étudié l'utilisation de Lactobacillus plantarum recombinant vivant en tant que véhicule de livraison orale pour un vaccin contre la maladie de Lyme pour invoquer une réponse immunitaire protectrice chez la souris. Parce que L. plantarum peut survivre dans le tractus GI, il a longtemps été pris en compte pour ce type de recherche. L. plantarum a exprimé avec succès des antigènes vaccinaux induisant une immunité chez les souris infectées par la maladie de Lyme. [7] En 2009, Alistair W. G. Waugh a étudié les effets du traitement avec Lactobacillus plantarum 299v sur des souris saines induites par un syndrome du côlon irritable par administration rectale de 1% d'isothiocyanate d'allyle dans 30% d'éthanol. Les souris ont ensuite été nourries par la force L. plantarum 299v pendant 28 jours. Les résultats ont montré que L. plantarum 299v a réduit l'inflammation et normalisé les intestins. [8] 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 Kleerebezem, Michiel, Jos Boekhorst, Richard van Kranenburg, Douwe Molenaar, Oscar P. Kuipers, Rob Leer, Renato Tarchini, Sander A. Peters, Hans M. Sandbrink, Mark WEJ Fiers, Willem Stiekema, Ren M. Klein Lankhorst,rolex submariner rouge replique, Peter A. Bron, Sally M. Hoffer, Masja N. Nierop Groot, Robert Kerkhoven, Maaike de Vries, Bjrn Ursing, Willem M. de Vos et Roland J. Siezen. (2003). [1] Séquence complète du génome de Lactobacillus plantarum WCFS1. Actes de l'Académie nationale des sciences, 100 (4), 1990 1995. 'Lactobacillus'. MicrobeWiki. 8 avril 2009 Kenyon College. 21 avril 2009. [2] 3.0 3.1 'Bacteria Genomes LACTOBACILLUS PLANTARUM' Institut européen de bioinformatique. Laboratoire Européen de Biologie Moléculaire. 21 avril 2009. [3] Beatriz del Rio, Raymond J. Dattwyler, Miguel Aroso,boite rolex submariner replique, Vera Neves, Luciana Meirelles, Jos F. M. L. Seegers et Maria Gomes Solecki1. (2008) [7] L'immunisation par voie orale avec le Lactobacillus plantarum recombinant induit une réponse immunitaire protectrice chez les souris atteintes de la maladie de Lyme. Inmunologie clinique et en vaccins,contrefaçon rolex submariner neuf, 15. (9), 1429 1435 Waugh, Alistair W. G., Rae Foshaug, Sarah Macfarlane, Jason SG Doyle, Thomas A. Churchill, Beate C. Sydora, Richard N. Fedorak. (2009). [8] Effet du traitement Lactobacillus plantarum 299v dans un modèle animal du syndrome du côlon irritable. Microbienne en santé et maladie, 21. (1), 33 37.

Les inondations créent l'état d'urgence à Courtenay

D'autres tempêtes de pluie et de vent devraient toucher l'île de Vancouver mercredi et jeudi contre les tempêtes qui ont causé des inondations, des pannes de courant et des arbres abattus.

Alors que la Grande Victoria a esquivé le pire des temps,contrefaçon montre rolex submariner date, la vallée de Comox et la vallée de Alberni ont été martelées lundi et mardi.

Les inondations à Courtenay ont amené le maire Larry Jangula à déclarer l'état d'urgence. La ville a fermé les rues et les sentiers dans les zones basses, ainsi que les installations récréatives de Lewis Park. Mardi, 82 mm sont tombés. Avec jusqu'à 70 mm de plus de prévisions pour aujourd'hui, Courtenay se prépare à empirer les inondations. Hydro a déclaré que le risque d'inondation se poursuivra jusqu'à jeudi. Les inondations pourraient éclipser les inondations dévastatrices qui se sont produites en 2009 et 2010,rolex submariner occasion paris replique, a déclaré un porte-parole de la Courtenay.

De Fanny Bay à Courtenay,contrefaçon occasion rolex submariner, certaines parties de la route intérieure sont devenues dangereuses en raison de la mise en commun de l'eau. Les inondations ont forcé la fermeture du pont de la rue Fifth Street de Courtenay, avec une circulation s'étendant sur deux kilomètres.

À Port Alberni, les résidents ont signalé des inondations dans des sous-sols et des milliers de pertes de pouvoir. Les équipages municipaux ont bloqué la troisième et la quatrième avenue inférieures, où les propriétaires d'entreprises inondés se sont précipités pour faire face à l'eau de pluie qui se dégageait alors que les égouts pluviaux débordaient. Le vent a déchiré le toit des ventes automobiles de Tar sur Third Avenue et les eaux pluviales ont forcé le personnel à évacuer.

Le service d'incendie de Port Alberni, le capitaine Herb Nadig, a déclaré: 'Beaucoup d'arbres vers le bas, des arbres sur les lignes électriques'. Les pompiers ont cordonné les zones où les lignes électriques étaient en panne et leur disaient aux résidents de rester à l'intérieur. Hydro a déclaré que le vent avait éliminé le pouvoir à environ 11 000 clients dans l'île du Nord et près de 4 000 dans l'île du Sud. Le mardi soir,cadran rolex submariner replique, le pouvoir était de retour pour la plupart des clients de l'île du Sud, mais des centaines étaient encore sans électricité plus au nord. Hydro. Le vent a frappé des arbres sur des lignes électriques et a causé beaucoup à la chute, at-elle dit. Les équipages hydroélectriques en les forçant à prendre des détours pour arriver à des endroits difficiles, a déclaré Louwers. Mardi matin, Maryann Rumney a sauté du lit après avoir entendu ce qui ressemblait à des meubles qui grattaient le sol de sa maison de Port Alberni. Il s'est avéré être un arbre qui tombe sur la vieille maison en arbre de son fils. 'Nous avons vécu ici 28 ans et j'avais toujours peur qu'il ne descendît', a déclaré Rumney.

La famille a abandonné les plans pour abattre la maison de l'arbre, qui n'est plus utilisée par le fils adulte de Rumney, Aaron. 'C'est un peu triste parce que [le mari de Rumney] Ross et Aaron l'ont construit quand Aaron avait six ans , Dit-elle. Dès que je suis entré dans la porte, je pouvais sentir l'humidité et trouver quatre pouces d'eau dans le sous-sol.

La Grande Victoria s'est échappée relativement indemne.

La pluie continuera aujourd'hui dans la Grande Victoria avec une attente de 25 à 35 mm, surtout entre minuit et midi, a déclaré Doug Lundquist, météorologue d'Environnement Canada. 'Une troisième tempête pourrait rouler jeudi. Mais vendredi, l'ensemble du système prend son envol'.

Minimum d'accises pour 2WD

KUALA LUMPUR: Le gouvernement a accepté de rationaliser le taux d'accise pour les véhicules à deux et quatre roues motrices avec une capacité de moteur d'au plus 1,r��plique prix collier van cleef.500cc à 60% en vigueur immédiatement.

Dans un communiqué de presse mercredi, le Département royal des douanes de Malaisie (RMCD) a déclaré que la décision de réduire l'accise de 65% à 60% a été prise après prise en compte de la forte demande de véhicules complètement construits actuellement.

La période de transition temporaire, les modifications qui seront publiées et prendront effet à partir du 13 avril 2017,collier van cleef occasion r��plique, la suppression de plus de 60% de l'accise sera accordée pour tous les véhicules impliqués, a déclaré Datuk Indera Subromaniam Tholasy,faux collier van cleef alhambra, directeur général de RMCD.

Ce mouvement, le prix des véhicules aux acheteurs doit être maintenu et les fabricants de véhicules ne peuvent pas augmenter les prix en fonction de l'augmentation du taux d'accise qui ont été publiés dans le cadre de l'Ordonnance sur les droits d'accise 2017, le 31 mars 2017,collier van cleef and arpels imitation, at-il déclaré.

Avant cela, le RMCD dans la Gazette du gouvernement fédéral a déclaré que l'accise pour les véhicules polyvalents, les services publics de sport et la fourgonnette d'une capacité de 1,5 litre et moins ont été augmentées de 5% de 60% à 65% à compter du 1er avril. Bernama

Les protéines luminescentes pour les hautes

RésuméL'utilisation de protéines fluorescentes a révolutionné notre compréhension des processus biologiques. Cependant, l'exigence d'un éclairage externe empêche leur application universelle à l'étude des processus biologiques dans tous les tissus. Bien que la lumière puisse être créée par la chimioluminescence, l'émission de lumière provenant des sondes chimioluminescentes existantes est trop faible pour utiliser cette modalité d'imagerie dans les situations où la fluorescence ne peut pas être utilisée. Ici, nous rapportons le développement de la protéine luminescente la plus brillante à ce jour, Nano lantern, qui est une chimère de Renforce luciférase améliorée et Vénus, une protéine fluorescente à haute efficacité de transfert d'énergie de résonance bioluminescence. Nano lantern permet l'imagerie en temps réel de structures intracellulaires dans des cellules vivantes avec une résolution spatiale équivalente à la fluorescence et une détection de tumeur sensible chez des souris sans cures qui se déplacent librement. Nous créons également des indicateurs fonctionnels basés sur Nano lantern qui peuvent imaginer Ca2 +, l'adénosine monophosphate cyclique et la dynamique des triphosphates d'adénosine 5 dans des environnements où l'utilisation d'indicateurs fluorescents n'est pas réalisable. Ces protéines luminescentes permettent la visualisation des phénomènes biologiques au niveau des cellules, des organes et du corps entier précédemment non visibles chez les animaux et les plantes. Introduction Bien que l'imagerie par fluorescence soit largement utilisée, sa dépendance à l'illumination externe empêche son application universelle. Par exemple, l'imagerie par fluorescence ne peut pas être utilisée facilement pour étudier les processus biologiques dépendant de la lumière, tels que la photoréduction visuelle ou la photosynthèse. Bien que l'enregistrement optique de la rétine sensible à la lumière ait été exécuté avec succès en utilisant une excitation de 2 photons avec un laser femtoseconde de 930 nm1, cette méthode n'est pas polyvalente car de nombreuses molécules biologiques ont une absorption significative aux longueurs d'onde visibles et infrarouges2. Par conséquent, les méthodes basées sur la fluorescence à la fois avec 1 photon et une excitation de 2 photons ne peuvent pas toujours être utilisées pour étudier les processus biologiques dépendants de la lumière. En outre, la fluorescence est incompatible avec l'imagerie des tissus profonds non invasifs d'organismes entiers et d'autres applications où le substrat cellulaire est autofluorescent (par exemple, les chloroplastes de plantes photosynthétiques), saturés de photopigments (hépatocytes porphyriques, mélanocytes ou épithélium pigmentaire rétinien) ou extrêmement photosensibles. Des problèmes expérimentaux surviennent également lorsqu'un éclairage externe est nécessaire, comme pour les technologies biologiques telles que l'optogenèse, l'inactivation de la lumière assistée par chromophore et la photolyse des composés en cage, ce qui empêche l'utilisation simultanée de l'imagerie par fluorescence. Enfin, la densité de puissance générale de l'éclairage externe pour la microscopie de cellules vivantes avec fluorescence (sous Wcm2) provoque parfois des effets phototoxiques dans les substrats visualisés, ce qui modifie le comportement cellulaire et mène finalement à la mort cellulaire. En revanche, la chimioluminescence génère un signal lumineux visible grâce à une réaction chimique localisée sans nécessité d'éclairage externe. Parce que les valeurs de kcat de luciférases classiques vont de 0,1 pour la luciférase de luciole (rendement quantique = 0,5) 3 à environ 4,4 pour Renilla luciferase (RLuc) 8 (rendement quantique = 0,r��plique collier trefle van cleef,053) 4, expression transitoire des concentrations micromolaires de luciférases, par exemple RLuc8 , Génère une densité de puissance de la lumière émise qui est 1/103 celle de la densité de puissance générale requise pour l'émission de fluorescence dans l'imagerie des cellules vivantes (environ 0,1 Wcm2). Par conséquent, bien que les protéines chimioluminescentes, y compris l'aequorine et les luciférases, aient été utilisées pour imaginer des cellules vivantes et des organismes 5,6, la production de lumière de ces protéines est insuffisante pour fournir une résolution spatiale et / ou temporelle équivalente à la fluorescence. Dans le cas des organismes lumineux, Tel que la pensée de la mer Renilla reniformis, le problème de la faible luminosité a été résolu dans la nature par le phénomène du transfert d'énergie par résonance bioluminescence (BRET), dans lequel l'énergie excitée d'un substrat luminescent, coelenterazine, liée à RLuc est transférée efficacement de manière intermoleculaire à L'accepteur de protéine fluorescente verte Renilla (rendement quantique = 0,3) par un mécanisme de transfert d'énergie de résonance de Frster (FRET), augmentant ainsi le nombre de photons émis environ six fois7. Sur la base de ce BRET intermoleculaire naturel, des sondes BRET intramoléculaires, telles que l'aequorine GFP8 et BAF Y9, ont été développées. Bien que ces sondes permettent l'imagerie des cellules vivantes avec une résolution améliorée dans l'espace et le temps, elles sont encore sous-performantes par rapport aux sondes à base de protéines fluorescentes en raison de la faible luminosité. Pour résoudre ce problème, nous avons obtenu un RLuc plus lumineux par mutagenèse aléatoire et fusion à une protéine fluorescente jaune (YFP) avec une efficacité BRET élevée. La protéine de fusion a montré une luminescence plus lumineuse que le BAF Y, permettant non seulement l'imagerie en temps réel des structures intracellulaires dans les cellules vivantes, mais aussi la détection de tumeurs sensibles dans une souris qui se déplace librement. De plus, nous avons développé des indicateurs de Ca2 +, de l'adénosine monophosphate cyclique (AMPc) et de l'adénosine 5 triphosphate (ATP) basés sur cette brillante protéine luminescente. Ces indicateurs luminescents permettront la visualisation après le contrôle optique de l'activité cellulaire ou enzymatique au niveau de la cellule unique, des organes et du corps entier chez les animaux et les plantes.RésultatsDesign et application de la protéine lumineuse lumineuse Pour améliorer la luminosité, nous avons conçu une protéine chimère basée sur eBAF Y9 (Note complémentaire 1), qui est une fusion de YFP amélioré et un RLuc amélioré, RLuc8 (4). Étant donné que l'efficacité de BRET, et donc la luminosité, dépend des propriétés photochimiques et physiques du donneur et de l'accepteur, nous avons affiné ces paramètres en améliorant la luminosité des donneurs, en maximisant le chevauchement spectral entre l'émission de donneur et l'absorbance d'accepteur à l'aide de Venus10 et en optimisant l'arrangement spatial du donneur Et accepteur dans la construction de fusion (note complémentaire 1, figure supplémentaire S1 et tableau complémentaire S1). La protéine résultante, que nous appelons Nano lantern, qui rappelle une source de lumière avec une échelle nanométrique (figure 1a), a montré une luminescence de 5,3 et 2,9 fois plus grande que RLuc8 et eBAF Y, respectivement, sur toute la plage d'émission (figure 1b). La luminosité améliorée de Nano lantern devrait générer des densités de puissance dans la gamme de 1Wcm2 (contre 0.1Wcm2 pour RLuc8) suite à une surexpression transitoire dans la gamme micromolaire dans les cellules humaines, et ainsi augmenter le potentiel d'imagerie.Figure 1: Développement de la protéine lumineuse lumineuse Nano lanterne (A) Schéma de la structure de domaine de Nano lantern. Les nombres représentent la position relative d'acide aminé dans la protéine d'origine. (B) Spectres d'émission de quantités équimolaires des protéines luminescentes Nano lantern, VRL10.3, eBAF Y9, RLuc8_S257G, RLuc8 et RLuc. Les mesures des spectres d'émission ont été effectuées au moins en trois exemplaires, et les données moyennes sont indiquées. (C) Imagerie luminescente (gauche) et fluorescence (droite) des cellules HeLa exprimant Nano lanterne ciblées sur le cytoplasme, les mitochondries et l'histone H2B. Les temps d'exposition pour les images de luminescence étaient respectivement 3s, 3s et 1s. Le temps d'exposition pour toutes les images de fluorescence était de 1 s. Le signal de fluorescence de référence a été capturé par Vénus passionnante avec de la lumière à 490 nm. Barres à l'échelle, 50 m. En effet, lorsque Nano lanterne a été exprimée dans des cellules HeLa, une image de luminescence avec une qualité presque comparable à celle des images de fluorescence a été obtenue. La lanterne Nano et les fusions avec des étiquettes de localisation définies ont permis de visualiser les compartiments cellulaires et les organites, tels que le cytoplasme, les mitochondries et le noyau (histone H2B), dans les cellules vivantes en utilisant des lentilles de faible grossissement (objectif X20 sec) avec des expositions brèves et 1 3 s ( Fig. 1c). Nano lantern a également permis de visualiser des structures plus fines, y compris des microfilaments, des microtubules et leurs conseils (EB3) avec une lentille de grossissement élevé (objectif d'immersion d'huile X60) et plus longues, 3 60s, expositions (figure supplémentaire S2). Par conséquent, le signal luminescent amélioré (Wcm2) de Nano lantern permet l'imagerie à haute résolution spatiale jusqu'à au moins le niveau subcellulaire, avec une qualité proche de celle de l'imagerie à base de protéines fluorescentes (FP). En effet, bien que la densité de puissance de la lumière émettrice de Nano lantern reste 1/102 inférieure à celle des émissions générales de fluorescence (à 100Wcm2), la qualité de l'image est définie par le rapport signal / bruit (rapport S / N). Dans l'imagerie par fluorescence, cela est compromis par des niveaux de bruit élevés provenant de la lumière d'excitation parasite et de l'autofluorescence à la fois de l'échantillon et du milieu. Dans l'imagerie chimioluminescente, la qualité ne souffre pas de faible niveau de signal en raison du très faible niveau de bruit. Étant donné que l'éclairage externe n'est pas nécessaire, un rapport S / N adéquat est conservé. À l'heure actuelle, la chimioluminescence est couramment utilisée pour la détection de tumeurs non invasives chez les souris vivantes pour la recherche sur les métastases tumorales et le dépistage anti-cancer11. Une luminescence plus brillante devrait permettre la détection de tumeurs plus petites. En effet, lorsque des lignées cellulaires du colon 26 d'adenocarcinome qui expriment de manière stable Nano lantern ou RLuc8 (colon26 / Nano lantern and colon26 / RLuc8) ont été implantées par voie sous-cutanée chez des souris nues BALB / c (figure 2a) et nous avons détecté seulement 103 cellules exprimant Nano Lantern 1 jour après la transplantation (figure 2b), qui est 1 ordre de grandeur mieux que les tumeurs exprimant RLuc8 (figure 2c). Figure 2: imagerie luminescente de souris avec des tumeurs expriment des lanternes Nano. (A) Position des cellules colon26 exprimant Nano lanterne (Cercles verts) ou RLuc8 (cercles rouges) dans les souris transplantées (vue dorsale). (B, d) Des images luminescentes représentatives des nombres indiqués de cellules injectées à 600s (b) et 1s expositions (d). (C) Comparaison dans des unités de lumière relative (RLU, pixels intégrés par s) de 1 107 cellules de colon26 / RLuc8 et Nano lantern. sont indiqués. (E) Cadres consécutifs d'images de taux vidéo de lanternes Nano exprimant des cellules tumorales dans une souris non rasée. Le signal luminescent tous les 60ms est montré en vert dans les images fixes et comme une série de pseudo-couleurs (bleu, cyan, vert, jaune, rouge et magenta) dans l'image fusionnée. Barres à l'échelle, 1 cm. La luminosité accrue de la lanterne Nano permettait l'imagerie de 105 et 106 cellules à des taux d'échantillonnage de 0,1 et 1 Hz, respectivement (figure 2d). De manière surprenante, nous pourrions même obtenir une image vidéo (30Hz) d'images des tumeurs 17 jours après l'implantation de 106 cellules tumorales dans des souris sans ailettes qui se déplacent librement (figure 2e et film supplémentaire 1). Dans les précédents rapports d'imagerie de cellules tumorales luminescentes chez des souris non anesthésiées12, les images réussies n'étaient obtenues qu'avec des souris nues, des échantillons de tumeurs plus vastes et des temps d'exposition prolongés (160 ou 200 contre 33 ms dans ce rapport). Une augmentation de la sensibilité et une imagerie plus rapide sans besoin d'anesthésie à l'aide de Nano lantern facilite grandement l'analyse de la croissance tumorale et des métastases chez les animaux vivants. Les indicateurs fonctionnels basés sur Nano lanternHaving ont démontré l'avantage des propriétés luminescentes améliorées de Nano lantern, la résolution spatiale micrométrique dans les cellules vivantes Et une meilleure résolution de la tumeur chez les animaux entiers, nous avons cherché à développer des indicateurs fonctionnels pour les molécules bioactives telles que le Ca2 +, l'AMPc et l'ATP à base de Nano lantern. Jusqu'à présent, deux types d'indices fonctionnels basés sur la chimioluminescence ont été rapportés; On utilise la complémentation de la luciférase fractionnée (CSL), dans laquelle la molécule de luciférase est divisée, une partie étant fusionnée au domaine du capteur d'une molécule bioactive et l'autre à un peptide qui lie le domaine du capteur. Ce type d'indicateur émet un signal lors de la reconstitution médiée par la molécule bioactive de la luciférase fractionnée13. L'autre utilise un indicateur basé sur BRET composé du domaine du capteur d'une molécule bioactive flanquée d'un donneur chimioluminescent intact et d'un accepteur fluorescent, dans ce cas, une réponse cellulaire est détectée comme une modification de l'efficacité BRET14. Bien que les indicateurs de type CSL aient un changement de signal plus important, leur intensité absolue est souvent trop faible pour être imagée. À l'inverse, les indicateurs de type basés sur BRET ont une intensité de signal suffisante pour l'imagerie; Cependant, son changement de signal sur la liaison de la molécule cible est généralement faible. Pour surmonter ces inconvénients, nous avons cherché à insérer un domaine de capteur dans Nano lantern pour créer un indicateur CSL / BRET hybride qui présenterait un changement de signal avec une intensité suffisante pour l'imagerie (Fig. Supplémentaire S3a). Un indicateur Ca2 + basé sur Nano lanternDans le roman Approche hybride, nous avons d'abord cherché à développer un indicateur Nano lantern pour Ca2 +, l'un des plus importants des deuxièmes messagers dans les cellules vivantes. Nous avons cloné le domaine de détection de Ca2 + (CaM M13) du cameleon jaune, un indicateur établi de Ca2 + basé sur FRET15, et cherché le site d'insertion optimal dans la lanterne Nano qui produirait un grand changement de signal et préserverait les émissions de haute intensité. D'autres propriétés importantes, y compris l'affinité au Ca2 + et la réversibilité de l'activité catalytique de la luciférase, ont également été examinées. En fin de compte, sur les sites testés, nous avons constaté que les insertions dans la boucle non structurale Gly228 / Gly229 dans RLuc8 qui relie les domaines de l'hydrolase et du bouchon étaient bien tolérées (Fig. Supplémentaire S3b et Note complémentaire 2). La construction résultante, nommée Nano lantern (Ca2 +), a montré un changement de signal de 300% à une luminosité de 35% de la protéine parentale aux concentrations de Ca2 + saturées (figure 3a). Les affinités Ca2 + de Nano lantern (Ca2 +) et ses dérivés (Schéma complémentaire S4 et Tableau complémentaire S2) étaient presque identiques à ceux de la série de couches virées jaunes parentales, ce qui suggère que la reconstitution de Rluc8 fractionné dans Nano lantern (Ca2 +) n'a pas entravé Le changement de conformation induite par Ca2 + dans le domaine CaM M13 (note complémentaire 2). sont indiqués. (C) Une série d'images du rapport pseudo-coloré des cellules HeLa exprimant Nano lantern (Ca2 +) prises à la vitesse vidéo,prix collier alhambra van cleef r��plique, après stimulation de l'histamine. Bar à l'échelle, 10 m. (D) Durée du changement de ratio L / L0 à un retour sur investissement (case blanche en (c)) dans une lanterne Nano Lan Lan (Ca2 +) HeLa. Le numéro indique le point de temps de chaque image dans (c). Les données représentatives d'au moins cinq expériences sont indiquées en (d) et (e). (E) Un temps typique du changement de ratio spatial L / L0 dans les ROI (cyan, magenta et jaune cases dans (c)) dans une autre cellule HeLa. (F) Temps de changement du rapport L / L0 dans un neurone hippocampeux de rat co exaltant Nano lantern (Ca2 +) avec le ChR2. ChR2 a été activé à plusieurs reprises dans les sessions d'illumination (2s), consistant en 15 cycles d'exposition de la caméra (100ms) et des impulsions de lumière bleue (0.8ms) qui ont été livrées pendant les périodes (30ms) lorsque l'exposition de la caméra était éteinte. Les chiffres indiquent les points de temps de chaque image dans (g). Les données représentatives de cinq mesures sont affichées. (G) Une série d'images du rapport pseudo-coloré d'un neurone hippocampeux de rat qui exprime la lanterne Nano (Ca2 +). Barre d'échelle, 10m. Pour comparer les performances de cet indicateur Ca2 + à une norme connue, nous avons exprimé Nano lantern (Ca2 +) dans les cellules HeLa. À la suite d'une stimulation avec l'histamine 10M, une pointe aiguë de Ca2 + (S / N = 70) suivie d'oscillations Ca2 + avec des amplitudes plus petites (S / N = 29) a été détectée avec un taux d'échantillonnage aussi rapide que 30 Hz (figure 3c). On pourrait même observer la propagation d'une onde cytoplasmique Ca2 + d'une extrémité de la cellule à l'autre,faux collier van cleef, comme on l'a déjà observé en utilisant le cameleon jaune 15 (figure 3e et film complémentaire 2). Les oscillations Ca2 + induites par l'histaminine ont été supprimées par l'addition de l'antagoniste du récepteur de l'histamine cyproheptadine, confirmant que le changement du signal luminescent reflète les changements dans le cytoplasme [Ca2 +] (figure supplémentaire S5). Les indicateurs antérieurs de Ca2 + basés sur CSL13 n'étaient pas totalement réversibles en réponse à la libération de Ca2 + physiologique ou stimulée. Nous avons confirmé par imagerie Nano lantern (Ca2 +) avec R GECO116 que la cinétique de Nano lantern (Ca2 +) est parallèle à celle des sondes à base de fluorescence (figure supplémentaire S6). De manière encourageante, Nano lantern (Ca2 +), exprimé dans des neurones d'hippocampe de rat dissociés (figure supplémentaire S7), et imagé à 10 Hz, pourrait signaler des pics cytoplasmiques [Ca2 +] spontanés et des changements transitoires (Ca2 +) dus à une stimulation réversible (50 mM KCl). Pour réaliser l'avantage théorique de l'imagerie Ca2 + à l'aide de sondes de luminescence sur des indicateurs basés sur la fluorescence, nous avons réalisé une imagerie Ca2 + combinée au contrôle de l'activité neuronale à l'aide d'outils opto-génétiques. L'expression ectopique des protéines photoréceptrices, telles que l'halorhodopsine et la canalrhodopsine2 (ChR2), a permis l'analyse fonctionnelle des cellules neuronales et de leurs réseaux avec la résolution du temps ms17. Pourtant, ces outils sont spectralement incompatibles avec les indicateurs Ca2 + fluorescents. La lumière d'excitation peut être utilisée soit pour contrôler le photorécepteur, soit pour mesurer le transitoire Ca2 +, mais pas pour les deux dans la même cellule en même temps. Parce que l'imagerie de luminescence peut être effectuée en l'absence de lumière externe, elle peut être associée à une stratégie opto-génétique sans interférence indésirable due à l'activité du photorécepteur. Pour démontrer cela, nous avons exprimé Nano lantern (Ca2 +) et ChR2 dans des neurones d'hippocampe de rat dissociés. Le signal luminescent a été imaginé tous les 100ms et ChR2 a été activé avec une impulsion de 0,8 ms de lumière bleue (438nm) pendant le temps mort de la puce CCD pour le transfert de données18. En réponse à 15 cycles de lumière d'activation,collier van cleef and arpels r��plique, une augmentation rapide a été observée dans le signal luminescent (figure 3f et film supplémentaire 3). Nous avons également détecté une diminution progressive du signal au niveau basal lorsque l'illumination a été terminée. La consommation catalytique du substrat (coelenterazine h) entraîne une diminution progressive de la ligne de base et de l'amplitude des transitoires. Ces résultats suggèrent que ces outils de neurobiologie synergiques peuvent maintenant être combinés en une seule approche expérimentale. À l'avenir, il est possible également de combiner d'autres systèmes de contrôle optique, tels que l'inactivation de la lumière assistée par chromophore des molécules cibles19 et la photolyse des composés en cage20, avec des indicateurs fonctionnels luminescents. Indicateurs améliorés d'AMPc basés sur Nano lanternImaging AMPc intracellulaire, un autre second messenger important , L'utilisation d'indicateurs fluorescents a été difficile en raison du faible changement de signal (1 15%) avec les indicateurs actuels basés sur FP 21,22,23. Pour examiner si la stratégie hybride CSL / BRET pourrait être appliquée pour construire un indicateur d'AMPc haute performance, nous avons cloné une série de motifs de liaison AMPc de la sous-unité régulatrice PKA ou EPAC1, dans Nano lantern au poste 228/229 (similaire à Nano Lanterne (Ca2 +)) (figure supplémentaire S8a). Les protéines recombinantes ont été purifiées et criblées pour des changements d'intensité en réponse à l'AMPc. Parmi les neuf constructions testées, trois motifs de reconnaissance d'AMPc ont donné un changement de signal important avec des affinités distinctes d'AMPc (Kd = 0,4, 1,6 et 3,3M) et une de ces trois lanternes Nano contenant un fragment d'EPAC1 (G170 à A327 avec Q270E) , Que nous avons appelé Nano lantern (cAMP1.6) (de son Kd), a montré la plus grande augmentation du signal (130%) lors de la stimulation AMPc (figure 4a, figure supplémentaire S8b d et note complémentaire 3). En revanche, les indicateurs basés sur FRET avec un domaine de reconnaissance d'AMPc identique n'ont montré qu'un petit changement de signal (11,7% pour les constructions basées sur le CFP / YFP, la Figure supplémentaire S8e et la Note complémentaire 3). Figure 4: Développement d'un indicateur AMC luminescent à la lanterne Nano . (A) Schéma de la structure de domaine de Nano lantern (cAMP). (B) Brillance relative de la lanterne Nano recombinante et de la lanterne Nano (AMPc) avec ou sans cAMP. sont indiqués. (C) Une image AMPc de 100 000 cellules D. discoideum exprimant Nano lantern (cAMP1.6) pendant la morphogenèse agrégée. Barre d'échelle, 1mm. (D) L'espace et le temps parcourent les lignes jaunes indiquées en (c) pendant 60 minutes. (E) Durée du changement d'intensité de la luminescence aux ROI indiqués en (c). Ce sont des données typiques à partir de cinq mesures. Pour examiner la capacité de Nano lantern (cAMP1.6) à détecter les changements intracellulaires de la concentration d'AMPc, nous avons utilisé les cellules Dictyostelium discoideum car la concentration cytoplasmique d'AMPc (ci-après [AMPc]) dans les cellules Dictyostelium augmente en réponse à l'extracellulaire Stimulation AMPc24,25, ce qui augmente indirectement [cAMP] thRugueuse

LA DIGNITE HUMAINE DEVRA ETRE AU CENTRE DE TOUTES LES POLITIQUES

Koichiro Matsuura, Directeur général de l'UNESCO et animé par M. Giandomenico Picco, Envoyé du Secrtaire gnral pour l 'L'Internationale Internationale du dialogue entre les civilisations qui a commenté le dialogue entre les civilisations est la question de la Gestion de la diversit. La mondialisation, la consquence du mouvement croissant des individus et de la diffusion des ides dans le monde entier, un dissip toute l'illusion d 'autarcie et rend indispensable le dialogue. Il a appel la cration d' un nouveau paradigme, qui ouvrira peut tre la porte Un nouveau contrat social international qui fait que la dignité humaine soit le capital de la vie internationale. Pour sa partie,collier van cleef and arpels r��plique, M. Pérez de Cuellar, ancien secrétaire général des Nations Unies, a dit qu 'il' agit de traiter du dialogue Entre les nations mais galement l 'intrieur des nations les problèmes rencontrés nous sommes confrontés à l 'heure actuelle rsultent de problmes aux aux nations. Les valeurs dmocratiques sont le remède le plus efficace ces problmes, à il expliqu.

Le conseiller de dpolitiser le dialogue entre les civilisations, les participants la table ronde se sont efforcs de comprendre les causes de la violence, de l'intolérance, du mpris et de la haine, qui certains ont la peur et au soupon. Ils se sont Demandez un commentaire sur les sentiments qui dcoulent d une conviction d 'tre dans son droit, conviction qui se transforme en coercition. Ainsi, M. Edgar Morin (France) un suggestion qui a divisé les individus et les socits est une Tendance percevoir l 'autre comme infrieur, nuisible ou dangereux. Evoquant la difficulté de la compréhension de l'autre et de la barbarie dans la civilisation, M. Morin a appel une tolrance fonde sur la couture et la comprension de l'autre, mme quand nous le dsapprouvons ou quand c 'est difficile ou douloureux. Il est un regrett que la civilisation occidentale se soit longtemps considérée comme au centre du monde, et qu 'elle se refuse à la connaissance de sa position en question et de revoir sa position. De mme, M. Richard Bulliet (Etats-Unis) a suggéré que 'on cre de nouveaux paramtres plutt de se contenter de visiter le' muse de l'humanité 'd' un point de vue occidental encore influenc par les conceptions impriales.

(Suivre 1a) 1a 5 septembre 2000

Mettant l 'accent sur l' unité qui existe au sein de la diversit humaine, plusieurs intervenants ont jug inacceptable la notion de 'choc des civilisations', que M. Ru Xin un qualifi de 'rsidu de la guerre froide'. Ils se sont mis à l'épreuve du processus de mondialisation et, comme M. Alexandre Yakovlev (Fdration de Russie), ont craint qu 'elle n' aboutisse une universalisation de la culture sur la base d 'un seul modle, que l' sur observer dj Dans l 'audiovisuel. Nous pensons que les cultures diffrentes doivent avoir la latitude de s' exprimer, et qu 'il ne soit pas de culture' universifiante ', chez il soulign. Plusieurs intervenants, entre autres M. Rex Nettleford (Jamaque ), Ont galement estimé que 'l'essentiel est une réussite' de l'étude des différents domaines et de l'expérience d'expatriation et de développement linguistique. Ils ont appel l 'instauration d' une ducation ax sur la comprhension de l 'Autre et la connaissance de la diversit du monde. L 'homme est multidimensionnel et tout ce que nous faisons tenir tenir compte de cette ralité, ajoutant M. Van Gingel des Pays Bas, en reconnaissant que le Conseil de l'Europe' un examen approfondi des contenus des ouvrages scolaires au sujet des différences Peuples, il tait apparu qu 'un travail de travail immense.

Ont pris la parole cet aprs midi: M. Masanori Aoyagi (Japon); M. Richard Bulliet, Mme Jane Cortez Edwards, Mme Flora Lewis et M. Ramazani (Etats Unis); M. Mohamed Javad Faridzadeh (Iran); M. Hans Van Gingel (Pays Bas); Mme Attiyah Inayatullah (Pakistan); Mme Ugn Karvelis (Lituanie); M. Koh Byong Ik (République de Core); M. Edgar Morin (France); M. Rex Nettleford (Jamaque); M. Javier Perez de Cuellar (Prou); M. Ru Xin (Chine); M. Wole Soyinka (Nigria) et M. Alexander Yakovlev (Fdration de Russie).

2 5 septembre 2000

Prsentant les questions que les participants la table ronde aborderont, M. GIANDOMENICO PICCO, Envoyé du Secrtaire gnral pour l 'L'Internationale du dialogue entre les civilisations, une observation du dialogue entre les civilisations est la gestion de la diversité. Il s'agit d'une découverte de la communauté du mouvement croissant des individus dans le monde et de la diffusion des ides. Cela ralit un dissip toute l'illusion d 'autarcie, et apprendre la diversité de l'expérience inévitable. Dans un tel contexte,r��plique sautoir van cleef alhambra, le dialogue est essentiel. Comment faire pour que ce dialogue soit mieux centr et qu 'il pse de tout son poids?

Répondant à cette interrogation, M. PEREZ DE CUELLAR, ancien secrétaire général des Nations Unies, a dclar qu 'il faut commencer par rflchir ce que nous entendons par dialogue voiture il' agit de traiter du dialogue entre les nations plus galement l 'intrieur des En ce qui concerne les problèmes rencontrés, nous sommes confrontés à l 'heure actuelle rsultent de problmes existant l' intrieur des nations. Il ya une estimation de 'ya pas d' autre manire de remédier à cet article. 'Instaurer des valeurs dmocratiques.

Prenant son tour la parole, M. RICHARD BULLIET (Etats Unis) s 'est dit frapp par le lien tabli par le Prsident de l' Iran, M. Khatami, entre les civilisations surtout lorsqu 'il voque la contribution du pote au dialogue entre Les civilisations. Il est dit que le dialogue entre les civilisations peut susciter des rflexions plus concrètes. Il est un prconis qui sont qui sont 'intressent ce sujet commencent par se concentrer sur les questions de notre poque, notamment la souverainet, l' intervention et le rle Des organisations non gouvernementales (ONG). En tant que professeur d'Universit et spcialiste de la civilisation islamique, il est un savoir-faire pour la connaissance des civilisations non occidentales est relue au domaine des connaissances locales, en particulier aux Etats Unis Le genre de connaissances d 'autres civilisations qui a atteint son apoge dans le priode de l' aprs guerre tait teint d 'imprialisme. Nous devrons tenter de créer de nouveaux paramtres plutt de se contenter de visiter la 'muse de l'humanité' d 'un point de vue occidental.

M. EDGAR MORIN (France) a expliqué que la comprhension des autres n 'est pas forcment dpendante de la quantit d' informations reue sur eux. Il faudrait plutt essayer de voir ce qui réserve les individus et les socits et qui peut se rsumer la tendance percevoir l 'autre comme infrieur, nuisible ou dangereux. La civilisation occidentale s' est estime pendentif de nombreuses annes comme tant au centre du monde, Et le difficile que l 'on constate aujourd'hui sans doute sur le refus de se remettre en question et sur la position de reconsidrer sa. Il y a d 'autre part la difficile comprendre l' autre. Ce matin, des intervenants sur le respect de l'histoire et de l'histoire de l'humanité dans l'histoire de la barbarie. Nous sommes en train de faire la connaissance de la vieillesse et de la vieillesse. Aimerions parler de la tolrance, comme autrefois nonce par Voltaire qui prconisait le ncessit d 'couter l' autre, mme quand nous le dsapprouvons. La dmocratie dcoule de cette faculté. Ensuite il ya ce qu 'a nonc Pascal, qui prconisait le ncessit d 'Couter et de comprendre mme quand cela représente un certain niveau de difficulté ou de souffrance pour nous.

3 5 septembre 2000

Nous pourrions donc recommander une ducation qui est en mesure de promouvoir la comprension. L 'unité ne doit pas forcment s' opposer la diversit, et nous devons tre capables de construire une base de données communautaire sur une communaut de destin qui est la condition sine qua non du dialogue des civilisations.

Mme UGNE KARVELIS (Lituanie) a fait savoir que le fils payé comptait abriter une discussion sur la question du dialogue des civilisations l 'anne prochaine. Il faudrait revenir, à elle estim, l' adage qui dit 'Connais toi toi mme pour connatre les autres 'Voiture il est impossible de bien percevoir correctement' autre chose sur ne sait pas tout fait ce que je 'sur est soi mme. La mondialisation ne doit pas nous faire oublier que l 'Internet n' est un moment accessible que par une minorit. Nous sommes de nouveau en train de crer une donne nouvelle favorable une poigne de riches. La mondialisation est en ralité la nouvelle manifestation d 'une civilisation qui ne sera favorable à la quête d'une initiale. Peut tre finira t on par s' apercevoir que ce n 'est en ralit qu' une nouvelle forme de civilisation dominante que L 'on essaie d' imposer tout le reste de la plante. La galaxie de Mc Luhan ne se débrouille pas sur ces derniers temps en train de mourir.

Prenant la parole, M. RU XIN (Chine) a dclar que le développement actuel des nouvelles technologies de la communication et de la mondialisation de la vie conomique sont irrversibles. En mme temps naissent de nouveaux problèmes transnationaux comme le VIH / sida et la pauvret et l 'inscurit, qui rclament la naissance d' une conscience mondiale pour leur trouver des solutions. Le monde se doit d 'avoir une perspective plus grand prénatal en compte les intrts de tous les trois humains. Les différents acteurs du jeu international, doivent, tout en cherchant l' amélioration de leur propre bien-être, respect des besoins d 'existence des D'autres peuples. De nouveaux problèmes ne se constamment au sein du processus de mondialisation en ce qui concerne le respect et la survie des socits humaines. Les valeurs des diffrents peuples et socits sont diffrentes, ce qui revient dire que l 'on ne peut donc leur imposer Un seul modle de développement et de socit. En ce qui concerne la Chine, elle est ouverte la rforme, ce qui ne veut pas dire qu 'elle va adapter le modle d' une autre socit. Les Etats et les peuples ont besoin de se respecter mutuellement si l 'sur la volonté de donner une chance vritable la paix et la prospère internationale. Ce matin quelqu' un vo de l'idée 'de choc des civilisations' mise par certains penseurs. Ce modle De penser le reste de la guerre, et nous ne pensons pas que les chocs entre cultures et nations sont inluctables. C 'est en dialogue et en respectant les sensibilités des autres que nous pourrons btir un monde mutuellement prospre et bnfique.

M. WOLE SOYINKA (Nigria) a suggéré 'identifier les nombreuses perspectives que l' sur l'adoption dans la civilisation des diffrentes, ainsi que les domaines relatifs aux civilisations qui sont en difficulté. , Une bande, au sein d 'un processus plus qu' elle ne reprsente pas une civilisation. M. Soyinka un conseiller de se pencher sur les raisons pour lesquelles nous assistons une nouvelle fusion de la violence et de l'intolérance.

4 5 septembre 2000

Il y a un langage qui prend en charge la forme d'une introspection, d 'un auto examen de la part de reprsentants de diffrentes civilisations afin d'comprendre pourquoi la leur susciter l'hostilité ou le ressentiment des autres.

M. MOHAMMED JAVAD FARIDZADEH (Iran) a estimé pour trouver un langage commun nous devons commencer par le dialogue. Avant de parler de la morphologie de la civilisation, nous devons comprendre qu 'il s' agit d 'un concept de l' poque moderne. Le rsultat du choc entre les civilisations doit faire l'objet d'un déroulement au niveau multilatéral. Quand nous entendons le mot dialogue, nous pensons Socrate, un penseur li Aristote ou encore de grands savants chrtiens ainsi qu 'aux philosophes existentialistes. Cependant, la question du dialogue ne se rapporte pas aux philosophies grecque, moderne ou occidentale et, ce titre , Ce que les diffrentes coles de pensée en ont pens doivent tre examin. Le dialogue des civilisations ne consiste pas savoir si nous souhaitons copieur ou non qui existe chez les autres, mais plutt exposer les conceptions propres chaque civilisation.

S 'inspirant des interventions faites par plusieurs chefs d' Etat de la sance de ce matin, Mme ATTIYA INAYATULLAH (Pakistan) a lou la capacit de l'islam intgrer et modifiant les changements culturels. Elle est un rappel que plusieurs intervenants ont galement voqu La capacit de l'islam surmonter le dualisme. Elle a rappel que le Secrtaire gnral des Nations Unies une recommandation 'utiliser la diversité comme un atout dans un monde de plus en plus interdépendant. Elle est un conseiller de vider les discours vides, de dpolitiser le dialogue entre les civilisations et d' envisager La paix grce la dmocratie. La reprsentante a souligner l'importance de la socit civile. La reprsentante a estim que la question de la violence est le mensonge la peur et le soupon, et qu 'il faille se demander comment venir à bout de sentiments qui dcoulent d' une conviction d 'tre dans son droit droit, la conviction qui se transforme en La coercition. Durant ce dialogue des civilisations, nous devrions nous efforcer de comprendre les causes de la violence. En gardant l 'esprit qui les humains sont caractriss par leurs civilisations, nous devons essayer de prendre conscience de l'unité' qui existe dans la diversité humaine . La reprsentante a dclar que le concept du choc entre les civilisations n 'est pas acceptable et le dialogue doit englober plutt qu' exclure.

Le thme de l'unité dans la diversité humaine et la discrétion par M. ALEXANDRE YAKOVLEV (Fdration de Russie), qui est une estimation de la condition principale pour la tenue d 'un dialogue tait sa dpolitisation. Nous ne croyons pas que les gens souhaitent sciemment la confrontation, la violence ou la guerre, cette attitude est plutot le fait de groupes ou de 'hommes politiques intresss. Si les gouvernements s' engageaient sur la voie de la rduction des dpenses militaires et consentement Des ressources aux contacts vritables entre les peuples, il est sr que ces derniers temps alors chapper l 'emprise des groupes d' intrt. Concernant par exemple la question de la dfense de l'environnement, nous pensons que l 'sur un tellement cr mentir la nature qu' inluctablement un jour elle prendra sa revanche. Quand on parle de la mondialisation, la crainte vritable que l 'on ressent Est celle de l'universalisation de la culture sur la base d'un seul modle, qui se traduit en ce moment parce que 'on observer d' abord dans l 'audiovisuel.

5 5 septembre 2000

Il ya en ce moment un sentiment pour que 'il ya une vulgarisation de la culture qui peut conduire une espèce de fin de la culture humaine humaine. Nous pensons que les diffrentes cultures doit avoir la latitude de s' exprimer, et qu 'il ne devrait Pas à faire de la culture 'universifiante'. Il faut se débrouiller sur les quels sont les principaux problèmes de l'humanité pour la fin de la vie privée des solutions. Ceci ne se fera pas dans l'esprit gnral de dmagogie qui rgne sur les discours des hommes politiques Et des chercheurs dominants en ce moment. Le dialogue ne peut être utilisé sur la base des relations entre personnes et non sur la base des changements entre les fonctionnaires, alors que les professionnels sont bienvenus.

M. REX NETTLEFORD (Jamaque) a dit que les cultures des Carabes ont conscience de leurs origines multiples. Le pluralisme et le pluralisme de la vie sont des faits tangibles et les rflexions sur l'avenir. Les tendances dans les coles occidentales n 'ont pas effac de notre moi que nous avons des racines dans les civilisations trs anciennes, beaucoup Plus anciennes. Le mot 'Amricain' qui a pris en charge par les Etats-Unis et leurs ressortissants ne doit jamais occulter le fait que tous ceux qui vivent dans cet hémisphère de l'établissement sont des Amricains. Nous prconisons que les nouvelles gnrations sont nourries de principes plus justes et plus quitables. Pensez l 'avenir et aux enfants qui naissent aujourd'hui' Hui et le seau se voir le monde du demain. Ils sont connus pour le monde et ne sont pas seulement peuplés de l'Atlantique Nord. L 'L'UNESCO et les Nations Unies pour le développement de la population et les dirigeants du monde entier mieux comprendre les vritables de la vie. Le multilinguisme dans tous ses aspects, doit tre la source du dialogue mondial. Pourquoi, sur encore aujourd'hui 'Hui une rencontre' mondiale 'entre dirigeants religieux, religions de l' Afrique en sont elles exclues, les voitures? Pourquoi prtendre que ce continent n 'a pas de civilisations? Et nous pourrions ainsi citer de nombreuses autres insultes. Les musiques du monde reflètent le besoin de 'l'expression des peuples. Il est finalement trange que ce que l' on ait voulu nous inculquer l 'cole soit l' antinomie de nos vrits. Le dialogue entre les civilisations ne possèdent pas un simple rhtorique, mais plutt une dmarche utile, qui ne déploie pas les ressources des problèmes majeurs de la survie des nations.

M. R. K. RAMAZANI (Etats-Unis) a dclar que le rajeunissement de la population mondiale est indescible et que les jeunes ont fait un rôle. Le rle des jeunes femmes doit galement tre renforc. Nous vivons dans un monde au sein de la diversité de l'être, mais ne coexiste pas avec l'unité, qui reste une aspiration. Mme dans la Charte des Nations Unies, le concept de souverainet des nations cohabite avec celui d'université. En en savoir plus,collier papillon van cleef imitation, la diversit et la souverainet des Etats sont acceptées, en cas d 'intervention humanitaire, entre dans le domaine de l'université'. Etablissant un lien entre le choc des civilisations et la mondialisation, M. Ramazani un suggère que le dialogue entre les civilisations soit juxtapos à la mondialisation ou de l'introduction des nouvelles technologies de l'information par le biais d 'un systme domin Par la science et l 'conomie.

6 5 septembre 2000

M. Ramazani une estimation de la fin du XXe sicle, nous nous trouvons une transitoire de bande,sautoir van cleef prix r��plique, dans lesquelles le temps et l 'espace produisent de nouvelles identités. Le dialogue des civilisations se tient compte de cette ambigüe et de carrefour entre plusieurs mondes. Le dialogue entre les civilisations est la recherche d 'un paradigme et patient de l'exploration', plutt que d 'avoir recours aux ides prconues. M. Ramazani a suggr que l' sur prenne en considration toutes les dimensions de l'humanité, qu 'Elles aient trait l' thique, la religion ou au style de vie, et non pas les seules dimensions conomique et politique. Il est souhaité que 'sur parvienne une' harmonie du tout qui ne dérange pas la vitalité de ses partis '.

M. MASANORI AOYAGI (Japon) un rappel que les changements et l 'volution du genre humain ont t favoriss par l' htrognit culturelle. Cependant, aujourd hui, il y a une tendance l 'l'homognisation. Tout en jugeant l 'internationalisation diffrente de la mondialisation, M. Aoyagi a estimé le premier processus contenait les germes du second. Le reprsentant a propos un' polylogue 'impliquant toutes les cultures plutt qu' un 'dialogue' qui risque d 'tre Plus restrictif et limite aux civilisations les plus fortes.

Man Enlists aide de 140 aimés pour une proposition de mariage VIDEO

Mark VanDyke voulait un peu d'aide pour répondre à sa petite amie, Kelly VanSickle. Il a donc demandé à 140 de leurs amis et de leur famille les plus proches de lui donner une main.

Dans une vidéo publiée sur YouTube au début du mois,van cleef imitation bracelet, VanDyke emmène VanSickle en promenade dans le centre-ville de Grand Rapids, Michigan,van cleef alhambra r��plique bracelet, où elle 'accueille' tous ses amis. VanSickle se méfie, mais VaDyke appuie et finit par expliquer la question à l'endroit où VanSickle a d'abord accepté de prendre rendez-vous avec lui.

Après avoir dit oui, tous les 140 des proches de la couple (y compris les membres des entraîneurs VanSickle de la cheerleading) se réunissent pour encourager le mari et la femme à être.

Dans une interview sur l'émission de radio 'Going Gonzo' du Michigan,van cleef replique clover bracelet, VanSickle a déclaré qu'elle avait soupçonné que VanDyke envisageait de proposer pendant un certain temps.

'Je savais que je voulais [la proposition d'être] privée, mais nous sommes des gens très sociaux et nous aimons les gens de notre vie, alors je savais qu'ils seraient impliqués', a déclaré VanSickle. 'Nous avons rencontré notre premier groupe de Les gens, puis le second, et ensuite j'étais comme 'Oh,van cleef and arpels r��plique bracelet, mec, nous allons ici'.

Regardez toute la proposition dans la vidéo ci-dessus. La famille et les amis font souvent des apparences de camée lors des propositions de mariage, un homme n'a même pas dit à ses proches qu'il les tournait pour sa proposition. Une autre vidéo de proposition virale, appelée «Isaac Live Lip Dub», présente également les amis et les amis de couple famille.

Préoccupation de blessure alors que Robson sortait à Hobart

Robson jouait son premier match de la saison après qu'un problème de poignet l'obligeait à sortir de l'ASB Classic à Auckland.

Le joueur de 19 ans a remporté le premier set 6 4 mais,van cleef arpels alhambra r��plique bracelet, après avoir purgé une double faute pour remettre son adversaire belge au début d'une seconde pause,bracelet replique alhambra van cleef, elle a quitté le match.

Bojana Jovanovski, la semeur No 8, a eu peu de problèmes lors de la réservation de sa place au prochain tour,van cleef arpels r��plique bracelet, battant Annika Beck 7 5 6 3, mais la quatrième équipe, Anastasia Pavlyuchenkova,van cleef clover r��plique bracelet, a échoué 6 3 6 2 contre Alison Riske.

Zhang Shuai a remporté la cravate chinoise contre Zheng Jie 6 3 6 1, tandis que Casey Dellacqua a renversé Alison Van Uytvanck 6 4 6 4.

Le duo espagnol Estrella Cabeza Candela et Garbine Muguruza Blanco se sont inscrits consécutifs sur Karin Knapp et An Sophie Mestach respectivement, mais la compatriote Silvia Soler Espinosa a été battue 6 7 (9 7) 6 4 6 4 par Kristina Mladenovic.

Keep Your Fucking Shit Off My Desk

Yo, yo, yo, yo, yo, bruthahs 'n' sistahs. H Dog ici, son Stone Cold Baadness, The Gangsta original, The Mack Daddy, The Freaky Gangbanga. Et j'ai quelque chose à dire à tous 'tous les chiens là-bas: gardez-moi' motherfuckin 'merci de mon bureau, ou je vais baiser à votre désolé l'esprit' une rapidité. Et je ne veux pas voir tous les 'comin' autour, mettant vos pieds dessus, non plus. Ou puttin 'tes barrettes de café sur lui et les laisser bouser les anneaux tout à l'envers du bois et de la merde.

'Parce que je garde ma mouche sur mon bureau. Je gots mes feuilles de calcul, mes dossiers hangin', mon dossier de compte délinquant, mes trombones, mon distributeur de notes Post It, mon planificateur de bureau mensuel, mes cartes de visite Midstate Office Supply, Mon stylo à bille à quatre couleurs, mes étiquettes d'adresse de l'imprimante à matrice matricielle et mon punch fraiche fracturé stoopid. Sans compter mon ordinateur. Je le jure, si je vois tout de 'tous à moins de trois pieds de mon ordinateur, je' Je vais mettre Lee Van Cleef sur ton cul de la chienne. Je viendrai à toi comme une bête mâle.

J'essaie de le garder réellement, sais ce que je dis '? Je veux arrêter la violence avant qu'il ne commence. Je pourrais dire rien' et attendre dans l'ombre comme un malade 'ninja, et quand un punk ass temp worker Viens et commence à lire 'ma' Attitude est un peu de chose qui fait une grande différence ', je peux sauter et frapper les dents de sucka.' Parce que ce serait mon droit. Un homme doit protéger ce qu'il est, n'est-ce pas?

Prenez ce qui s'est passé la semaine dernière. Judy Metzger, cette personne qui se débrouille d'Accounts Payable,van cleef & arpels imitation bracelet, se rend dans son bureau autour du bureau,copie van cleef diamond bracelet, puttin 'cupcakes wit' les putains de smiley et merde sur les pupitres des gens. J'aime 'Whus ce visage souriant Merde-t-on 'tout être puttin' sur mon bureau? ' Et elle aime, 'J'ai fait des petits gâteaux pour tous les membres du bureau hier soir!'

Maintenant, je ne prends pas la merde de personne, et je suis sûr de ne pas t'embrasser de pute de la part des Comptes fournisseurs, alors je reprend mon ouvreur de lettres et je lui fais du fou de kung fu. 'Flag yo' ass outta ici, bitch, et gardez-moi 'fuckin' cupcake shit offa mon bureau de volée. '

Elle sort de la salle et va à son superviseur, Myron Schabe, de l'autre côté de la salle. Comme si j'avais peur de ça. Myron plus vieux que la merde et il porte des cravates comme Pee Wee Muthafuckin 'Herman ou quelque chose'. Alors, il se rend dans la cabine et dit: «Herbert, je pense qu'il y a eu un malentendu. Ce fut le tour de Judy cette semaine pour faire un régal. ' Je lui dis que je ne crains pas les chiennes de la puttance des comptes fournisseurs ', pas de merde sur mon bureau. Mais cet imbécile de Myron continue de pousser, dit-il, à moi: 'Ce fut une beauté, Herbert,van cleef and arpels r��plique bracelet, rien d'autre. C'est le Mois de l'Apprentissage des Travailleurs de Co,van cleef clover replique bracelet, et tout le monde est prévu d'apporter un régal. Tu es inscrit Pour le mercredi prochain. '

Donc vous savez ce que je lui dis? Je dis: 'Je ne vais pas apporter de mal à la mère', les malades. Les gâteries sont pour les vieilles dames dans la maison de soins infirmiers et la merde. Et on ne va pas se diriger ', ils sourient face à des conneries sur mon bureau de vol de drogue. Je gots tout où je le veux, et ain 't pas petit va être fuckin' tout ça. Alors prenez-vous 'bitch ass, tie-papa et sortez de ma cabine avant de vous couper, beee yaatch!'

Après cela, Myron sortit de là avec son 'li' l entre ses jambes. Ain 't pas de superviseur responsable des comptes fournisseurs motherfucka va dire à Herbert Kornfeld quoi faire. Et personne d'autre, d'ailleurs. Vous mettez de la merde sur mon bureau, vous venez de signer votre mandat de décès. Je veux dire. Les chefs seront pilotés.

Comment en savoir plus sur Opera

'J'ai gagné à l'opéra parce que c'est seulement pour les riches'.

Ce n'est pas vrai. Oui, obtenir des sièges en première ligne au plus des opéras de premier ordre vous coûterait un mois d'épicerie. Mais si vous désirez sacrifier votre vue fantastique sur les pieds des artistes, des sièges bon marché (en particulier pour les étudiants) sont habituellement disponibles.

Non, à moins que vous ne vous ennuyez par le meurtre, l'intrigue, la magie, les identités commutées et les amoureux étoiles croisés, auquel cas il y a peu d'espoir. D'accord, peut-être que cela pousse un peu trop fort, mais c'est vraiment excitant si vous lui donnez une chance. Il s'agit simplement de choisir le bon opéra avec une musique accrocheuse et une histoire en mouvement rapide. Ne vous inquiétez pas, nous vous donnons quelques recommandations plus tard qui vous empêcheront de hocher la tête et de bavarder sur ces sièges de velours chers.

'L'opéra est une forme d'art mort, donc ça ne vaut pas la peine d'être passé'.

Aujourd'hui, les compositeurs expérimentent l'opéra, essayant de trouver de nouvelles façons de maintenir la forme en vie. Et le public d'opéra qui connaît la croissance la plus rapide aux États-Unis en ce moment est celui des gens dans les années 20 et 30, de sorte que les classiques gardent leur attrait.

'J'ai gagné à l'opéra parce que tout chanté dans une langue étrangère et je peux le comprendre'.

Il est vrai que les opéras les plus connus ont été écrits en Europe et sont fréquemment réalisés dans leur original italien, allemand ou français. Aujourd'hui, de nombreuses compagnies d'opéra effectuent des traductions afin que le public puisse suivre l'action en cours. Beaucoup d'autres suivent le chef d'orchestre Metropolitan Opera et installent des sous-titres au-dessus de la scène ou à l'arrière des sièges. Peu importe la langue dans laquelle se trouve l'opéra, si vous suivez nos instructions, vous êtes prêt à vous amuser.

Maintenant, vous sentez-vous idiot? L'opéra n'est rien de ce que vous avez pensé. Mais avant de frotter notre victoire superficielle dans votre visage, réalisez que certaines de vos notions préconçues sont correctes:

L'opéra est longue (par rapport à d'autres formes de divertissement).

Parce que tous les mots dans l'opéra sont chantés, pas parlé, il faut plus de temps pour parcourir l'intrigue. Vous pouvez vous attendre à passer au moins 2 à 3 heures à l'opéra, y compris au moins un entrainement de 15 minutes pour vous étirer et attendre pour la salle de bain. Au moins ce plus de soulagement que Spielberg nous donne.

Opera est essentiellement un jeu de musique.

Ouaip. Bien sûr, il y a des dialogues, des questions, des arguments et même des moments de silence dans l'opéra; Cependant, l'ajout de musique rend tout plus dramatique.

L'opéra est la musique classique,imitation van cleef and arpels bracelet.

Attendons, avons-nous simplement dit que le nouvel opéra expérimentait différents types de musique? Certes, mais la plupart des opéras standard est ce que vous considérez comme de la musique classique. Il y a quelques exceptions, comme The Who 'Tommy', un opéra rock écrit en 1969, mais vous ne devriez pas attendre d'entendre des guitares et des tambours sortir de la fosse d'orchestre. Donne peur par les mots «musique classique», bien que regarder les gens agir sur scène est un monde à part de regarder le plafond lors de la classe d'appréciation de la musique de la neuvième année.

L'opéra que nous connaissons a commencé dans la période baroque (1600 1750) quand un groupe de compositeurs italiens a décidé d'imiter les maîtres du théâtre: les anciens Grecs. Les Italiens croyaient que les Grecs avaient chanté leurs pièces de théâtre, ne les ont pas parlé, et ainsi les Italiens ont décidé de raconter leurs propres histoires à la musique. Bien qu'ils aient complètement faux sur les Grecs (Sophocles était sourd), ils ont produit une forme d'art totalement nouvelle. Opera aujourd'hui reste très similaire à ce que les Italiens ont développé.

Lorsque les Italiens ont créé l'opéra, il s'agissait de deux composantes principales, qui continuent d'être une partie intégrante de l'opéra:

Les récits, qui contiennent des dialogues sur la musique, poussent généralement l'intrigue vers l'avant. C'est à ce moment-là que vous pensez que les acteurs ont juste chanté leurs phrases. Ce n'est pas une chanson,replique van cleef and arpel bracelet, mais simplement une discussion tendre.

Arias, plus mélodiques et élaborés sur un certain sentiment ou action. Ce sont les chansons que les dames grossières (ou minces) chantent. Les chœurs, dans lesquels beaucoup de gens chantent à la fois, peuvent également être intercalés.

Partie 2: La diffusion de l'opéra

Comme l'opéra a fait son chemin à travers l'Europe, ses styles ont commencé à changer aussi. Wolfgang Amadeus Mozart (1756 1791) a contribué à amener l'allemand dans la scène d'opéra dominée par l'Italie. Il a écrit de nombreux opéras, en allemand et en italien, qui sont très accessibles en raison de leurs parcelles en mouvement rapide, des histoires intéressantes et de la belle musique. Ludwig van Beethoven (1770 1827), un autre compositeur très célèbre de cette période, n'a écrit qu'un seul opéra, 'Fidelio', qui a propulsé l'opéra allemand vers l'avant.

C'était à la fin des années 1700 que l'opéra était clairement séparé en deux genres: l'opéra seria (grand opéra sérieux) et l'opéra buffa (opéra comique,bracelet trefle van cleef imitation, signifiait plus pour les classes inférieures).

C'est pendant la période romantique (fin des années 1700 au milieu des années 1800) que nous commençons à rencontrer l'image de la grosse chanteuse d'opéra. Les opéras sont devenus plus mélodramatiques, motivés par l'émotivité qui a commencé à se développer dans tous les arts européens. Tous les compositeurs romantiques ont écrit dans un style aussi dramatique (les Italiens Gaetano Donizetti et Vincenzo Bellini ont écrit beaucoup d'opéras moins fantaisistes), mais la scène était dominée par deux noms: Richard Wagner (prononcé 'VAG ner') et Giuseppe Verdi. Le Wagner allemand s'est éloigné de la tradition récitatif / aria et a décidé d'écrire une mélodie particulière pour chaque personnage ou thème qui apparaîtra chaque fois qu'il est venu sur scène. Ses opéras sont très complexes et difficiles à écouter, même pour les amateurs d'opéra les plus expérimentés. Verdi, d'autre part, peut être très accessible avec une petite préparation. Il a écrit un grand nombre d'opéras, complétant 20 à la fin de sa vie; Bien que tous ne soient pas des chefs-d'œuvre, il est toujours considéré comme l'un des meilleurs compositeurs d'opéra, sinon le meilleur.

Au début des années 1900, les États-Unis ont tenté de pénétrer dans la scène de l'opéra, en particulier avec George Gershwin 'Porgy and Bess', qui représentait la vie des Afro-Américains dans les années 1920 à Charleston. N'a pas eu beaucoup de succès dans la poursuite de la tradition opératoire, en plus de populariser certaines représentations musicales qui ne sont généralement pas considérées comme des «opéras», comme «Les Miserables» (une importation britannique).

Pour plus d'informations, consultez le site de l'histoire de l'opéra dans Ressources.

Si vous avez déjà regardé PBS (et nous savons que vous l'avez, même s'il s'agissait d'un accident), vous reconnaissez les Trois Tenors: Placido Domingo, Luciano Pavarotti (maintenant décédé) et Jose Carreras. Bien qu'ils aient chanté de nombreux arias magnifiques, regarder trois vieillards gros sur un stade nu peut ne pas vous rendre chaud et lourd. Néanmoins, il est bon de savoir quels sont les rôles dans un opéra standard.

Les femmes: les chanteuses d'opéra féminin sont catégorisées par leur voix de chant: soprano, mezzo soprano et alto (de la plus haute voix au plus bas). Traditionnellement, les sopranos sont les héroïnes, et les mezzo sopranos et altos sont les mères, les sorcières, les sidekicks et les femmes âgées. Les chanceux.

Les hommes: les chanteurs masculins d'opéra sont également catégorisés par la hauteur de leurs voix de chant: le ténor, le baryton et la basse, encore de plus en plus élevé au plus bas. Les ténors sont les chanteurs célèbres et jouent généralement le héros, tandis que les baryts et les basses sont relégués au poste de ducs maléfiques, pères, boulangers et criminels. Semble familier? Cela ne veut pas dire que les mezzos, les altos, les baritones et les basses ne reçoivent de bonne musique; Mais pour votre histoire d'amour douce et démodée (ou roman tragiquement voulu), vous pouvez compter sur les sopranos et les ténors pour vous amener en larmes.

C'est là que votre bibliothèque locale entre. Parce que les opéras utilisent généralement deux ou trois CD,bracelet van cleef and arpels imitation, ils sont assez chers à acheter, afin de pouvoir être en sécurité et d'écouter quelques-uns gratuitement avant de décider de quoi investir.

Louis van Gaal avertit que West Ham trouvera un stade olympique difficile

Le manager de Manchester United, Louis Van Gaal, a averti West Ham United qu'il leur sera difficile de passer du Boleyn Ground,van cleef diamond bracelet imitation, qui accueille son dernier match mardi soir, au stade olympique la saison prochaine.

Van Gaal a une expérience personnelle de ce déménagement en tant que gestionnaire d'Ajax de son ancien champ 'De Meer' en 1996 à l'Amsterdam Arena, qui a été construit pour l'offre d'Amsterdam pour les Jeux olympiques de 1992. Il a déclaré que son équipe Ajax,replique prix bracelet van cleef, Qui ont remporté la victoire de la Ligue des champions de 1995, ont lutté dans leur nouvelle maison.

'C'est une grande nuit et je pense que les joueurs le ressentent aussi', a déclaré Van Gaal. 'Mais quand j'ai changé avec l'Ajax de l'ancien stade, De Meer, à l'Arena d'Amsterdam où Ajax joue encore, les premiers matchs à l'arène d'Amsterdam, nous avons perdu. C'est toujours important l'influence du stade. Mais quand nous sommes absents nous Ont toujours des amateurs fantastiques. '

'Nous avons joué dans l'ancien stade devant 20 000 personnes et nous sommes allés au nouveau stade, c'était 55,000, c'était une grande différence', at-il expliqué. 'Nous devons imaginer à De Meer que les terrains de formation étaient très proches du stade. Mais dans le nouveau stade, ils étaient plus loin. Nous devons marcher tous les jours beaucoup plus loin. Et quand c'est chaque jour, ce n'est pas sympa'. Van Gaal a prévenu que seule la prochaine génération de joueurs, qui ne connaissaient pas l'ancien stade, pouvait être à l'aise dans le nouveau. 'Il faut attendre la prochaine génération', at-il dit, 'parce qu'ils ne connaissent pas mieux'.

'C'est un négatif pour nous,replique van cleef bracelet alhambra, bien sûr', a-t-il déclaré. 'Nous devons jouer contre un adversaire qui dit adieu au stade et qui ne veut pas perdre dans l'ancien stade. Ils ont déjà perdu à Manchester United lors du dernier match de FA Cup, c'est aussi l'histoire. Ce n'est pas bon pour nous, et West Ham United est une très bonne équipe. Nous avons beaucoup de respect pour West Ham United. Ils sont un grand club historique en Angleterre. Nous ne voulons pas gâcher leur parti, mais nous avons besoin des trois points. C'est différent. '

Van Gaal a averti que son équipe pourrait lutter contre le sommet d'Andy Carroll, en particulier avec Marouane Fellaini suspendu. 'Je suis très préoccupé par [Carroll] parce que je suis toujours en train d'organiser. Nous sommes normalement l'équipe la plus petite de la Premier League, donc nous avons des problèmes avec des jeux fixes. Je ne peux pas nier cela'. Anthony Martial est prêt à manquer avec une blessure à l'ischio-jambeté subie à Carrow Road samedi dernier.

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